家族型肌萎缩索硬化动物模型脊髓侧角神经元的特征.pdfVIP

中文摘要 家族型肌萎缩侧索硬化动物模型脊髓侧角神经元特征 摘 要 lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(amyotrophic 因未明神经系统变性病，选择性损伤大脑皮层运动神经元、脑干运动神经 核神经元、脊髓前角a运动神经元，导致进行性加重的肌肉无力、萎缩， 最终因呼吸肌麻痹死亡。近年来研究发现部分ALS患者存在自主神经系 统、锥体外系系统、感觉系统等非运动神经区域受累的症状，提示ALS 可能是一个多系统累及的神经变性疾病。MurataY发现ALS伴发昼夜血 压的变化，血压与心率之间的相关性的降低，严重可诱发循环衰竭、心律 失常乃至猝死Ⅲ；及其他自主神经异常的表现如：排汗增加及减少【2】、唾 液分泌减少【3】、胃排空时间延长【4】等改变。 Takahashi PG分别报道ALS患者胸髓中间外侧核神经 H及Kennedy 元的丢失【5—1，ItohT发现神经元免疫活性的改变【71及KihiraT也在萎缩神经 基因突变的家族型ALS患者短期内出现自主神经衰竭，尸检发现延髓自 究发现安静状态下早期转基因鼠心率增高，提示疾病早期自主神经功能损 伤‘101。 成了中间外侧柱(IML)，在调节自主神经功能方面具有重要作用。 本实验拟应用甲苯胺蓝染色及免疫组化的方法，观察家族型肌萎缩侧 的结构及乙酰胆碱酯酶的表达情况，旨在探讨脊髓侧角神经元在ALS的 发病过程的变化特征，为ALS发病机制研究提供一定的理论基础。 方法： 1模型建立及分组 饲养繁殖家族型肌萎缩侧索硬化动物模型SODlG93A转基因小鼠，参 考VercelliA【¨】等的1．5分评分法进行评分，4分为发病时间，1分为死亡 时间，60天为症状前期，4分为症状早期，1分为终末期。各对照组为同窝、 中文摘要 同月龄未转人突变的SODl基因的小鼠。每组各3只小鼠。 2取材 10％水合氯醛350mg／kg腹腔注射麻醉后，心脏灌注4％多聚甲醛固定 (T7．T9)，分别以4％多聚甲醛固定48h。 3甲苯胺蓝染色 后固定的组织块经梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续组织 计数脊髓侧角神经元。 4免疫组化染色 用乙酰胆碱酯酶进行免疫组化染色。 5统计学处理 采用SPSS13．0统计学软件对数据进行统计处理。采用均数±标准差 元计数之和，三组数据的比较采用单因素方差分析，两组数据的比较采用 两个独立样本比较的t检验，以a=0，05为显著性检验标准。 结果： 1模型建立 free，SPF)环境中，喂以灭菌的SPF级颗粒型鼠类饲料及灭菌 pathogen 非SODlG93A转基因鼠。 2甲苯胺蓝染色 2．1上胸髓(T1．T3) 症状前期、发病期、终末期SODlG93A转基因小鼠中神经元计数分别 中文摘要 症状前期和发病期期较终末期比较均有显著性差别(尸0．05)。发病期及 终末期神经元计数较对照组有显著性差别(氏O．05)。症状前期及发病期 转基因鼠神经元大致正常，终末期神经元变性。 2．2中胸髓(T4．T6) SODIc拇3A转基因小鼠症状前期、发病期、终末期神经元计数分别为 因小鼠神经元细胞计数较对照组有显著性差别(尸O．05)。症状前期及发 病期转基因鼠神经元大致正常，终末期神经元变性。 2．3下胸髓(T7．T9) SODlG93A转基因小鼠在症状前期、发病期、终末期神经元计数分别 症状前期和发病期较终末期比较均有显著性差别(P0．05)。终末期 症状前期及发病期转基因鼠神经元大致正常，终末期神经元变性。 3免疫组化染色 3．1上胸髓(T1．T3) SODlG93A转基因小鼠症状前期、发病期、终末期神经元计数分别为 症状前期和发病期较终末期比较均有差别(尸0．05)。发病期神经元细胞 计数较对照组有显著性差别(尸O．05)。症状前期及发病期神经元包浆呈 深褐色，胞核无色，成多边形。终末期神经元变性，着色变淡。 3．2中胸髓(T4．T6) SODlG93A转基因小鼠症状前期、发病期、终末期神经元计数