急性波动性高血糖对活体大鼠胰岛素敏感性影响的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· 急性波动性高血糖对活体大鼠胰岛素敏感性影响 的研究 刖 罱 糖尿病是一组由遗传和环境因素相互作用所致的代谢性疾病，由于胰岛素分 泌缺乏和(或)其生物作用障碍导致的糖代谢紊乱，同时伴有脂肪、蛋白质、水、 电解质等的代谢障碍，以慢性高血糖为主要特征。慢性高血糖常导致眼、肾、神 经和心血管等多脏器的长期损害、功能不全或衰竭。业已证实氧化应激是糖尿病 慢性并发症的主要发病机制之一，活性氧(ROS)在糖尿病慢性并发症发病机制 中的之一主要是其对组织和细胞的细胞毒性损伤，ROS包括超氧阴离子、羟自由 基、过氧化氢、一氧化氮(NO)等。NO可迅速和超氧化物结合形成更强的氧化 剂——过氧化亚硝酸盐(ONOO-)。ON00．可通过影响细胞的氧化还原状态和离 子通道、使蛋白质发生硝基化或失活，进而限制线粒体呼吸，导致细胞凋亡。 近年来研究表明：糖尿病慢性并发症的发生与发展不仅与血糖整体水平升高 有关，而且与血糖的波动性也有密切关系，血糖波动性越高，慢性并发症的危险 性越大。国外曾进行过一项试验，观察“正常血糖和高血糖交替”对人脐静脉内 皮细胞凋亡的影响，结果发现，“波动性高血糖组’’对内皮细胞的损伤比“稳定性 高血糖组”更加严重。该项研究提示：波动性高血糖更能增强蛋白激酶C(PKC) 活性，激活氧化应激反应，促进内皮细胞凋亡【¨，并最终加速动脉粥样硬化的发 展。临床研究也正实：波动性高血糖可显著增加2型糖尿病的微血管病变和心血 管死亡危险【21。反复波动的高糖环境下市，由于适应能力欠缺，加速了细胞形态 和功能的损剖31。DCCT和UKPDS试验的大量循证医学研究证实严格控制血糖(即 “强化治疗’’)可以显著减少糖尿病的并发症，尤其是微血管并发症。同时也必须 看到，血糖控制越严格，低血糖事件的发生率越高f45】，血糖波动的幅度越大，前 者的益处在一定程度上被后者所抵消。为此，国际上提出了“精细降糖，平稳达 标’’这一新的治疗理念，简单的说，就是“既要降低高血糖，又要防止低血糖。 因此，近年来国际上对血糖波动的研究正在逐渐得到重视。目前国际上关于 血糖波动的研究多集中于血糖波动对动脉内皮细胞的影响，是体外研究。而且目 前的研究主要局限在血糖波动对糖尿病并发症的影响，对于血糖波动对正常机体 的影响有何影响；对正常机体胰岛细胞及胰岛素靶细胞敏感性等这些关于糖尿病 发生机制的方面研究较少，特别是因为由于急性血糖波动动物模型建立的困难， 所以针对急性血糖波动对机体影响的的研究，尚未见报道。本研究拟采用高浓度 葡萄糖输注的方法建立活体急性血糖波动大鼠动物模型，以组织病理学、免疫印 记技术、RT-PCR等不同的检测方法对血糖波动大鼠肝脏、脂肪、肌肉及胰腺等器 官进行检测，探讨体内血糖波动对活体大鼠机体的影响。 实验材料及方法 一、 实验动物 验动物中心提供，清洁度I级，随机被分为3组，分别为对照组、血糖波动组、 持续高血糖组，常规饲料自由饮水，温度224-l℃，湿度50％左右，明／暗周期为 12h。 二、 建立持续高血糖、波动性高血糖大鼠动物模型 大鼠适应实验室环境3．5天后，用1 0％水合氯醛(按体重0．35mg／kg)腹腔麻 醉，将聚乙烯导管2根，分别植入右颈内静脉用于输液和左颈动脉用于采血。大 鼠术后恢复5天，进行输液。干预因素：①对照组予0．9％生理盐水，定时检测血 糖使血糖维持在5．5±0．5mmol／L左右，在实验第44小时后进行正葡萄糖．高胰岛 小时，然后血糖控制在20mmol／L持续1小时)；③持续高血糖组予50％葡萄糖注 射液持续输注，每小时检测血糖一次，使血糖维持在204-0．5mmol／L左右。所有 实验大鼠输液时间在48小时。输注相应液体48小时后，动物称重，10％水合氯 醛按0．3ml／lOOg腹腔注射麻醉动物，固定于解剖台，剪去胸腹部毛发，迅速开胸 左叶、腋下脂肪及腓肠肌标本，速冻．70℃保存。 2 三、 主要实验方法 1、血清胰岛素测定：酶联免疫法； 2、血清及组织匀浆MDA、SOD测定：比色法； 3、血糖测定：采用葡萄糖氧化酶法(BIOSEN5030，德国)； 4、大鼠肝细胞凋亡、胰腺细胞凋亡测定：应用T