缺血再灌注对肝癌细胞多药耐药表型的作用.pdfVIP

目 录 1 缺血再灌注对肝癌细胞多药耐药表型的影响………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………3 1.3 前言……………………………………………………………6 1.4 材料与方法……………………………………………………10 1.5 结果……………………………………………………………23 1.6 讨论……………………………………………………………38 1.7 结论……………………………………………………………45 1.8 参考文献………………………………………………………46 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………50 2 致谢……………………………………………………………51 3 肝癌多药耐药机制的研究进展（综述）………………………52 2 缺血再灌注对肝癌细胞多药耐药表型的影响 摘 要 目的：本研究通过模拟人肝癌细胞株（HepG2 ）和人肝癌耐药细胞 株（HepG2/ADM ）缺血再灌注过程，探讨缺血再灌注导致微环境改 变对肝癌细胞耐药性的影响，为进一步探索新的途径逆转肝癌细胞多 药耐药提供前期研究基础。方法：将人肝癌细胞株HepG2和人肝癌 耐药细胞株HepG2/ADM培养至对数生长期，两细胞株分别设立灌注 组 （HepG2灌注组：HC组；HepG2/ADM灌注组：HAC组）和缺血再 灌注组 （HepG2缺血再灌注组：HR组；HepG2/ADM缺血再灌注组： HAR组），其中灌注组用灌注液灌注8小时；缺血再灌注组用缺血液 灌注4小时，再灌注液灌注4小时，模拟肝癌细胞缺血再灌注过程。倒 置显微镜观察灌注组和缺血再灌注组的细胞形态变化，逆转录PCR半 定量检测灌注组和缺血再灌注组多药耐药基因1 （multidrug resistance gene-1，MDR 1）和多药耐药相关蛋白2 （multidrug resistance protein-2 ， MRP2 ）mRNA 的表达，Western blot法检测P-糖蛋白（P-glycoprotein ， P-gp ）和肺耐药蛋白（lung resistance protein ，LRP ）蛋白的表达， MTT法检测阿霉素（ADM ）、5-氟尿嘧啶(5-FU)两种抗癌药物对灌注 组和缺血再灌注组细胞生长抑制率的影响。数据均采用均数±标准差 x 表示（ ± ｓ），使用SPSS17.0统计软件进行统计学处理，两样本均 数的比较使用t检验，多个样本均数多重比较使用单因素方差分析 （SNK法）。结果：（1）MDR 1mRNA在HC组和HR组的相对表达量 3 分别为0.322±0.036和0.447±0.05 1，两组比较具有显著差异（P ＜0.05 ）， MDR1mRNA 在HAC 组和HAR 组的相对表达量为0.458±0.056 和 0.450±0.043 ，两组比较无明显差异 （P ＞0.05 ）；MRP2 mRNA在HC 组和HR组的相对表达量分别为0.265±0.043和0.548±0.051，两组比较 具有显著差异 （P ＜0.05 ），MRP2 mRNA在HAC组和HAR组的相对表 达量为0.540±0.044和0.532±0.050，两组比较没有差异（P ＞0.05 ）；（2 ） P-gp在HC组和HR组的相对表达量分别为0.222± 0.025和0.327±0.045 ， 两组比较具有显著差异（P ＜0.05 ），P-gp在HAC组和HAR组的相对表 达量为0.492±0.055和0.539±0.062，两组比较无明显差异 （P ＞0.05 ）； LRP在HC组和HR组的相对表达量分别为0.339±0.064和0.157±0.038 ， 两组比较具有显著差异 （P ＜0.05 ），LRP在HAC组和HAR组的相对表 达量为0.772±0.057和0.749±0.06 1，两组比较没有明显差异（P ＞0.05 ）。 （3 ） MTT