耐药相关蛋白及糖调节蛋白联合检测肺癌化疗耐药性研究.pdfVIP

耐药相关蛋白和糖调节蛋白联合检测 肺癌化疗耐药性研究 博士研究生： 王佳瑞 指导教师： 王 琪 教授 专业名称： 内科学 摘 要 研究背景及目的： 肺癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率和致死率都居各种肿瘤之首。 化疗耐药是影响肺癌疗效的主要因素之一。肺癌的耐药主要分为原发性 耐药和继发性耐药，前者表现为肿瘤细胞对化疗药物的天然不敏感，后 者是肿瘤细胞因抗癌药物诱导或其他因素的激活而产生的耐药性。肺癌 对化疗药物的耐药是一个多因素参与的复杂过程，主要与化疗药物的药 代动力学、肿瘤细胞特异性、肿瘤细胞生存的微环境三大因素密切相关。 而且各种因素之间相互依赖、相互制约、相互调节。 化疗药物种类繁多，目前常用于肺癌临床治疗的主要有VP．16、顺 铂等。VP．16属于鬼臼乙叉甙类，是细胞周期特异性药物。以顺铂为代 表的铂类药物是116i床治疗各种类型肺癌的常规用药，通过形成链内或者 链间交联影响DNA的复制、合成，引起细胞的凋亡。 细胞特异性因素与细胞内一系列耐药相关蛋白的表达及其介导的耐 药密切相关。目前研究较多的与肺癌有关的耐药相关蛋白主要有P．糖蛋 resistance- associated resistance．related protein，MRP)，肺耐药相关蛋白(1ung 和拓扑异构酶II II Q(TopoisomeraseIIa，Topoa)。研究表明P-gP、MRP、 用。但是国内外的相关研究大多集中于其中的一种或几种，将五种耐药 相关蛋白联合检测以及关于它们与肺癌耐药相关性的报道甚少。 除了细胞特异性因素可以引起化疗耐药之外，耐药还与肿瘤生存的 微环境密切相关。由于血供不足，实体瘤通常处于一种低氧、低糖、酸 中毒的微环境中。这种特殊的微环境通常会导致肿瘤细胞的葡萄糖调节 应激反应，诱导糖调节蛋白(glucose·regulatedproteins，GRPs)的表达。 分别对四种细胞系进行研究发现，肺癌细胞中GRP78和GRP94的表达 与VP．16的耐药有关，但不同细胞系之间的差异以及机制尚不清楚。 众所周知，肺癌化疗耐药是一个复杂的过程，并非单一因素，单一 蛋白作用的结果。耐药相关蛋白和糖调节蛋白可能共同参与了肺癌对化 疗药物的耐药，但两者之间的关系尚不清楚，深入研究两组蛋白的相互 关系以及在肺癌耐药中的作用，有利于提高化疗疗效。 为了全面的了解多种耐药相关蛋白在肺癌化疗耐药中的作用、糖调 节蛋白对不同肺癌细胞系耐药的影响和机制以及耐药相关蛋白与糖调节 蛋白之间的关系，本课题开展以下研究。 研究内容： 1．耐药相关蛋白在肺癌原发性耐药中的作用 采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光的方法对耐药相关蛋白P．gP、 MRP、LRP、GST-兀和TOPOII a在四种不同类型肺癌细胞系(SK．MES．1、 检测各细胞系对顺铂、阿霉素和VP．16的耐药性。分析耐药相关蛋白在 肺癌对顺铂、阿霉素和VP．16耐药中的作用。 2．耐药相关蛋白在肺癌继发性耐药中的作用 采用RT．PCR、Westernblot和免疫荧光的方法对五种耐药相关蛋白 测，分析耐药相关蛋白在肺腺癌顺铂继发性耐药中的作用。 3．P．gp的下调对肺癌耐药的影响 采用RT-PCR和免疫荧光的方法检测不同类型肺癌细胞系维拉帕米 处理前后P．gp的表达，MTT法检测维拉帕米处理前后不同类型肺癌细胞 系对顺铂和VP．1 6耐药 6耐药性。分析P．gP在不同细胞系对顺铂和VP．1 中的影响。 4．糖调节蛋白对肺癌耐药的影响 采用RT-PCR、