肌萎缩侧索硬SOD1G93A转基因小鼠中内质网应激的变化.pdfVIP

中文摘要 肌萎缩侧索硬化SODIG93A转基因小鼠中内质网应激的变化 摘 要 lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(amyotrophic 进行性运动神经元变性为主要病理特点。以脊髓前角、脑干运动核团和大 脑皮层运动神经元慢性损害为主。ALS发病机制包括：遗传环境因素如： SODl基因突变；谷氨酸兴奋毒性；氧化应激反应；免疫损伤；营养因子 失衡等。内质网应激是近年来许多研究学者提出的关于ALS发病机制的 达错误折叠的蛋白，聚集于内质网腔和神经元胞体内，引起内质网应激 reticulum (endoplasmic 轻内质网蛋白负荷；随着病程的进展突变的SODl大量聚集，超过了内质 网应激处理错误折叠蛋白的能力，细胞稳态遭到破坏，内质网应激激活内 基因的小鼠行为学及病理改变与人类家族性ALS极为相似，是公认的研 究家族性ALS的小鼠模型。本实验以SODlG93A转基因小鼠为研究对象， 质网应激的变化。 方法： 1．转基因小鼠的鉴定和行为学评分 B6SJL 小鼠的小部分鼠尾组织，提取组织中的DNA进行PCR反应，鉴定携带突 变的SODl的阳性小鼠。并对阳性小鼠进行运动行为学观察和分组。 2．westernblot RJ的评分标准分为症状前期组 将SODlG93A转基因小鼠按照Snow (出生后约120天，5分)，每组均设立同窝同年龄对照。新鲜取材小鼠 腰髓，．80℃保存备用。提取腰髓总蛋白，通过westernbolt方法测定内质 中文摘要 SODlG93A转基因小鼠不同时期的表达。 3．免疫组化 将SODlG93A转基因小鼠分为症状前期、症状早期和终末期，每组均 设同年龄同窝对照。用多聚甲醛固定小鼠脑干和腰髓组织。振动切片，4℃ 疫组化染色；将小鼠腰髓进行GFAP免疫组化染色。 blm结果显示不同时 结果：ATF6a、caspaSe一12的免疫组化和westem 异。ATF6a P50 P90在Tg组症状早期开始下降，终末期下降最明显。ATF6Q Tg组症状早期表达增多，终末期比症状早期略有减少但仍然比症状前期 和control组增多。Pro caspase．12在Tg组终末期下降，cleavedcaspase．12 Tg组症状早期表达增多，终末期比症状早期略有减少但仍然比症状前期 着色变浅，胞核着色加深，组织出现空泡化，神经元数量减少。control 差异，神经元胞体完整、形态正常。不同时期小鼠腰髓星形胶质细胞 早期开始腰髓中可见大量的棕色体积较小的GFAP染色阳性的细胞，且多 突起呈星形，即星形胶质细胞。随着病情的进展，GFAP染色阳性细胞数 目逐渐增加。Control组腰髓GFAP染色星形胶质细胞甚少，不同时期没 有明显差异。 结论：内质网应激及内质网应激介导的凋亡在SODlG93A转基因小鼠 腰髓中主要发生在症状早期和终末期。SODlG93A转基因小鼠发病部位， 腰髓、脑干运动核团和大脑运动皮层，三者的病变程度不同。以腰髓最重， 其次是脑干运动核团，而大脑运动皮层几乎没有明显的细胞死亡。在腰髓 和脑干运动核团既发生内质网应激又发生内质网应激介导的凋亡；大脑运 动皮层仅发生内质网应激，没有内质网应激介导的凋亡发生。转基因小鼠 腰髓症状前期开始出现星形胶质细胞的轻度增生，随着疾病的进展，星形 胶质细胞增生程度逐渐加重。 中文摘要 关键词：肌萎缩侧索硬化；SODlc93A转基因小鼠；内质网应激；内质 网应激介导的凋亡；星形胶质细胞 英文摘要 The of reticulumstressinSODlG93A c