四点弯曲应力刺激对人骨髓间充质干细胞增殖活性的作用.pdfVIP

四点弯曲应力刺激对人骨髓间充质干细胞增殖活性的影响 硕士生姓名： 杨春洋 指导教师： 汤欣孝暇 专业名称： 外科学 摘要 目的：观察四点弯曲应力刺激对人骨髓间充质干细胞的增殖活性以及细胞周 期的影响。 方法：实验于2010．9_2011．3在大连医科大学附属第一医院中英再生医学中 心完成。 1．使用全骨髓培养法分离人骨髓间充质干细胞。进行原代培养，扩增后备用。 2．利用四点弯曲应力细胞加载仪(四川大学华西医学院与电子科技大学联合 and 研制，专利号：(CN2534576 No．353135)，行爬片处理。分组：空白组，不加力；实验组，实验组频率均为0．5HZ， 空白组不受力学信号刺激，其他培养条件与实验组一致。 3．细胞行力学干预后， 用倒置相差显微镜观察细胞形态、排列。分别用四 甲基偶氮唑细胞计数法、流式细胞仪周期分析、共聚焦显微镜检测钙离子含量来 测量细胞增殖和细胞周期。所有实验均重复三次。 4．统计学处理：实验数据均以均数4-标准差来表示，使用SPSSl6．0软件包进 行单因素方差分析，P0．05具有统计学意义，P0．01具有显著统计学意义。 结果： 1．利用离心法结合全骨髓培养法培养细胞增殖迅速，传代稳定。 2．四点弯曲应力细胞加载仪性能稳定，准确，培养板未出行裂痕，变形等情况。 细胞接种加力板后12~24h贴壁，贴壁良好，24h后细胞覆盖率约达80％～90％， 无细菌污染现象，可适用于应力刺激体外细胞效应的实验研究。 3．通过四甲基偶氮唑法细胞计数检测细胞增殖、流式细胞技术检测细胞周期及 PI指数，激光共聚焦显微镜钙离子探针检测细胞内钙离子浓度，发现适当大小的 机械应力刺激对人骨髓间充质干细胞增殖具促进作用，其中30001xstrain的应力刺 激作用最明显，过强的机械应力刺激(5000rtstrain)对细胞不具有促增殖效应，并可 能存在抑制作用。 结论： 适当的机械应力刺激可以促进人骨髓间充质干细胞增殖。 关键词：人骨髓间充质干细胞机械应力刺激增殖 Effectof mechanicalstressoncell four-pointbending ofhumanbonemarrow proliferation stemcells mesenchymal Master degreecandidate：YangChunyang Xin Supervisor：ProfessorTang Major：surgery Abstract theeffectofmechanieaIstretchstresson of study proliferation Objective：To human stem bonemarrow-derived cells(BMSCs)． mesenchymal was outin of medicine Methods：The earned Laboratoryregenerative experiment