外源性BMP-7联合VEGF诱导大鼠脂肪干细胞向成骨细胞分化的实验探究.pdf

一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………．1 英文论著摘要……………………………………………………………………．3 二、英文缩略语………………………………………………………………………．．6 三、论文 自仃占…………………………………………………………………………………………………………．7日U舌…………………………………………………………………………………………………………·7 材料与方法………………………………………………………………………．7 实验结果…………………………………………………………………………10 讨论………………………………………………………………………………………………………．．15 结论………………………………………………………………………………………………………．．16 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………18 五、参考文献…………………………………………………………………………19 六、附录 综j签………………………………………………………………………………………………………．．2l 在学期I、日J科研成绩………………………………………………………………34 致谢………………………………………………………………………………………………………．．35 个人简介…………………………………………………………………………36 ·中文论著摘要· 胞分化的实验研究 目 的 BMP一7，VEGF作为骨组织工程中的生物活性因子有促进骨折愈合和骨生长的 作用，而脂肪干细胞作为组织工程中的种子细胞能在特定的培养条件下分化成成 骨细胞，为明确BMP一7，VEGF是否有促进脂肪干细胞向成骨细胞转化的能力，因 此研究脂肪干细胞经低浓度BMP-7，VEGF短期诱导后分化为成骨细胞情况。 方 法 动物称重后，戊巴比妥钠过量麻醉处死，无菌条件下取出腹股沟处脂肪，尽 量剔除软组织和小血管，PBS缓冲液冲洗3～5次，将脂肪组织剪成l立方毫米小 后离心，160mmol／LNH。CL裂解红细胞10 X min，离心弃上清，以1106／ml密度接 种至含基础培养基的培养瓶。基础培养基成分为：DMEM／体积分数10％的FBS，100 U／ml青霉素，100U／ml链霉素。48h后换液，除去未贴壁细胞。细胞培养至第 二代亚融合状时细胞铺板，免疫荧光鉴定脂肪干细胞表面标志物CD44，鉴定后的 IJ l-t 细胞随机分为4组：四组都加DMEM／IO％FBS，0．1mol／L地塞米松，50mo]／L维 生素C，10mmol／LB一甘油磷酸钠，100 U／m1青霉素，100U／ml链霉素；在 第三组加：VEGF(10ng／m1)；另设置一空白组，加高糖DMEM。每3d更换培养 基。至1，5，7，10，14天观察细胞生长及转化情况，检测MTT，成骨细胞计数。当 四组诱导液诱导2周时分别进行碱性磷酸酶，免疫组化，及茜素红染色，检测ALP 5lain，色深，接种6h丌始贴壁， 8h后，细胞丌始增殖，3-,5d达 ％左右融合。成骨细胞在生长过 程中表现出均一的短梭形或三角形，培养一段时间后细胞呈铺路石样改变，经ALP 染色胞质呈黑紫色，免疫组化染色胞质呈深黄色，形成的钙结节，经茜素红染色 胞转化为成骨细胞，第二组加：BMP一7(10ng／m1)经7天可诱导脂肪干细胞转化 干细胞转化为成骨细胞，而空白组则无成骨细胞出现，MTT，成骨细胞计数，ALP VE6F组空白组。 结 论 BMP一7联合VEGF有促进脂肪干细胞向