左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的毒性作用的体外探究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………3 英文缩写…………………………………………………………………6 研究论文 左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞毒性的作用体外研究 前言…………………………………………………………………7日IJ吾 …………………………………………………………………7 材料与方法…………………………………………………………8 结果…………………………………………………………………14 附图 …………………………………………………………………17 附表…………………………………………………………………21 讨论…………………………………………………………………22 结论…………………………………………………………………24 参考文献……………………………………………………………24 综述 喹诺酮类药物及其化合物诱导细胞凋亡的研究进展………29 致谢………………………………………………………………………35 个人简历…………………………………………………………………36 万方数据 中文摘要 左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞毒性的作用体外研究 摘 要 目的：探讨喹诺酮类药物对纤维环细胞的作用。 方法：这项研究的目的是以离体实验探讨左氧氟沙星对大鼠纤维环细 胞的影响。酶消化法来原代培养大鼠的纤维环细胞，贴壁的细胞融合为单 层时，用含有EDTA的0．2％的胰蛋白酶消化后传代培养．当细胞传至第3代 时，以不含胎牛血清以及酚红的DMEM／F12培养液来培养细胞，按照以下 浓度来分组实验，每组为5到6个样本。对照组：以不含左氧氟沙星的培养 的左氧氟沙星干预，细胞培养24小时后，应用：(1)应用倒置相差显微镜 来观察大鼠的纤维环细胞形态；(2)用实时定量PCR的法来检测纤维环细 行大鼠纤维环细胞最终凋亡率的检测。(5)运用MTS方法测定细胞增殖活 胞分别以浓度为(O，30，60，and 90}tg／m1)的左氧氟沙星处理，随即研究左 氧氟沙星对其可能的细胞毒性作用。 结果： (1)原代大鼠的纤维环细胞多呈现出多角形与长梭形，且轮 廓明显，细胞核呈现出圆形以及椭圆形，细胞质内可见有分泌颗粒，24～ 48h后细胞可贴壁生长，7～8d细胞即进入其对数生长期，可传6～8代。经 左氧氟沙星作用过的细胞可观察出细胞皱缩、空泡形成等凋亡征象。(2) 以流式细胞学技术观察大鼠纤维环细胞在不同浓度的左氧氟沙星处理下 的细胞形态结果显示，左氧氟沙星在浓度为099／ml时大鼠纤维环细胞的凋 凋亡率为12．83％+0．67％，差异具有统计学意义。即左氧氟沙星是以浓度 依赖的方式引起了大鼠纤维环细胞的凋亡率逐渐升高。(3)用caspase．3 万方数据 主塞垫墨 度依次为101．tg／ml、20I，tg／ml、40pg／ml、801．tg／ml左氧氟沙星的条件下，细 倍。差异具有统计学意义。(4)通过MTS方法检测细胞活力，结果显示左 氧氟沙星浓度为lO、20、40、80 gg／ml时，细胞的活力分别降懈tJ95．8％， 83．2％。差异具有统计学意义。(5)用Westem 91．5％，88．2％，and blot技术 来检测大鼠纤维环细胞中的caspase．3蛋白在不同浓度的左氧氟沙星处理 下的表达。其结果显示：当对照组、左氧氟沙星浓度依次为3099／ml、 9±o．03、0．28±0．02、 60肛g／ml、901xg／ml时的灰度值(／13．actin)分别为：O