重组人血管内皮抑制素逆转人肺腺癌A549DDP细胞顺铂耐药性的探究.pdfVIP

重组人血管内皮抑制素逆转人肺腺癌A549／DDP细胞 顺铂耐药性的研究 硕士研究生： 徐佳维 指导教师： 孙秀华教授 指导小组： 吴 涛副教授 专业名称： 肿瘤学 摘 要 背景：肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率有逐年增加的趋势。 目前肺癌的治疗是以综合治疗为主，化学治疗在肺癌治疗中有着重要地 位。顺铂(DDP)是肺癌治疗的常用化疗药物，然而，由于耐药的发生，常 常导致肺癌化疗的失败，并限制了铂类药物的广泛应用。重组人血管内 瘤细胞的营养供应，重组人血管内皮抑制素毒副作用少，安全性好，与 化疗药物联合可提高化疗疗效，但其化疗增效的机制目前尚不清楚，单 纯应用重组人血管内皮抑制素抑制肿瘤血管形成的理论很难解释化疗增 效的机制。本研究主要探讨重组人血管内皮抑制素能否逆转A549／DDP 细胞顺铂耐药性及其机制。 6)对 A549／DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用及其机制。 方法：本实验采用人肺腺癌细胞株A549及其顺铂耐药细胞株 A549／DDP作为研究对象，以顺铂与重组人血管内皮抑制素两者联合及两 者分别单独给药的方式，分别作用于人肺癌细胞株A549及耐药细胞株 药性的不同及不同株细胞间耐药性的差别。采用MTT法检测重组人血管 用，确定重组人血管内皮抑制素无细胞毒浓度，并检测此浓度重组人血 管内皮抑制素能否逆转A549／DDP细胞对顺铂的耐药性。用流式细胞仪测 定重组人血管内皮抑制素单药组、顺铂单药组、及重组人血管内皮抑制 blot法检测重组人血管内皮抑制素单药组、顺铂单药组、及重组人血管内 皮抑制素联合顺铂组分别作用于A549／DDP细胞后的耐药蛋白表达情况， 研究重组人血管内皮抑制素逆转A549／DDP细胞株顺铂耐药性的可能机 制，同时设立A549细胞对照组、A549／DDP细胞对照组，并检测两组对照 组的耐药蛋白表达情况，检测的耐药蛋白包括：P糖蛋白(P—gP)及拓扑异 构酶II(TOPO．II)。 结果：1．MTT法结果显示：浓度为400ug／ml的重组人血管内皮抑制 人血管内皮抑制素与DDP联合用药时，A549／DDP细胞的IC50降为 明重组人血管内皮抑制素增强了DDP对A549／DDP细胞的杀伤作用，具有 逆转A549／DDP细胞耐药的作用。 2．流式细胞仪结果：重组人血管内皮抑制素单药组细胞凋亡率为 2．01％，顺铂单药组为1 3．47％，重组人血管内皮抑制素联合顺铂组为 29．26％，A549／DDP细胞对照组为0．99％。 3．western 达量均较A549细胞高，重组人血管内皮抑制素联合DDP组处理后的 P值均小于O．05，有统计学意义。 结论：重组人血管内皮抑制素能部分逆转A549／DDP细胞对DDP的耐 降低相关。 关键词：重组人血管内皮抑制素 肺肿瘤A549／DDP细胞株耐药 2 human ReversaleffectofrecombinantEndostatin on resistanceinA549／DDPhuman cisplatin lung in adenocarcinomacellsvitro Master candidate：Xuiawei degree j