重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞增殖抑制作用的实验探究.pdfVIP

重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞增殖抑制作用的实验研究 摘要 目的研究重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞是否具有增殖抑制作用， 为临床肿瘤药物的筛选提供研究依据。 材料和方法 (1)人脑胶质瘤细胞株(U251，购自南京凯基生物科技发展有限 EDTA-O．125％胰蛋白酶消化，按1：3-4传代。 4h后终止培养，将上清液吸出后每孔各加入二甲基亚枫150p1，振荡溶解lO分钟， 490nm波长下测各标本吸光度。 (3)盖玻片放入6孔板中，胶质瘤细胞以5×106／．1接种培养，48小时后更 换培养液，然后更换为含有重组人血管内皮抑制素的培养液，用4％多聚甲醛缓冲液 Radiance 固定，在37℃条件下用Fluo-3避光负载30min。应用Bio-Red2100型激 光扫描共聚焦显微镜操作系统的Ar离子激光系统，扫描用Fluo-3标记的胶质瘤细 胞。 (4)胶质瘤细胞分别加入含有重组人血管内皮抑制素的培养液，并设一对照组， 继续培养24小时，胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，70％的冷乙醇固定24h。离心去 氩离子激发器激发波长488nm波，分析PI荧光直方图上凋亡细胞百分率。 结果 (1)脑胶质瘤细胞的形态学特征倒置显微镜下观察培养的细胞可见 人脑胶质瘤细胞的形态呈多样性，大小不一，胞体向四周伸出突起，胞质内可见 圆形透亮分泌颗粒。经重组人血管内皮抑制素作用48h后，可见细胞形态收缩变 圆，聚集成团，部分细胞破碎，以坏死细胞为主。 (2)MTT法测定细胞增殖抑制率重组人血管内皮抑制素各实验组的吸光 光度值均较对照组值小。对照组的吸光光度值0．302±0．012，50ng／ml、100 ng／ml、 150 0．05)。 I IIYIIIIIIi2llllll011IIIIIIIIIlllllllllllIIIIIl429Y208㈣3 人血管内皮抑制素作用后的细胞内的游离Ca2+的荧光强度明显增强。图像分析显示 钙离子的浓度逐渐增加，各组间差异均有统计学意义(PO．05)。 (4)流式细胞仪分析结果显示重组人血管内皮抑制素可阻滞细胞周期于GO／GI 期，出现明显的凋亡峰，S期细胞数减少。 结论 重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞有明显的抑制作用，且具有剂 量依赖性，能抑制人脑胶质瘤细胞增殖，为使该药可能成为一种间质治疗药物提供 了基础研究依据。 关键词 胶质瘤；间质化疗；细胞培养；重组人血管内皮抑制素；增殖 研究生：程园园(肿瘤学) 导师：安永恒教授 关键词胶质瘤；间质化疗；细胞培养：重组人血管内皮抑制素；增殖 humanendostatinon inhuman Researchofrecombinant proliferation lie cells amoilgsllec ABSTRACT hasaninhibitive The ofresearchiStodetectifrh．Ecndostain Objectivepurposes effectinthe onhuman cells．Itaimsto atheoreticalbasisfor proliferationglioma provide the