锌铁调控蛋白ZIP4在前列腺癌中的表达意义和作用机制研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 锌铁调控蛋白ZIP4在前列腺癌中的表达意义 及作用机制研究 刖 罱 前列腺癌是美国男性中最常见的恶性肿瘤，据美国癌症协会调查显示，2008 年美国前列腺癌的新发病例是186，320例，而死于前列腺癌的病例数为28，660。随 着人均寿命的延长和膳食结构的改变，我国前列腺癌的发病率J下在逐年升高。前 列腺癌的发生发展是一个多基因改变，多因素作用的共同的结果，因而对前列腺 癌发病机制的进一步研究显得至关重要。 锌是人体必须的微量营养元素之一，是体内200多种含有锌指结构的酶和转 录因子保持活性并参与细胞结构组成及催化活性的必要组成部分，其在精液中能 促进精子的生成、成熟、激活、获能过程，对男性生殖功能有很重要的作用。研 究已经表明锌缺乏会导一系列疾病，包括致发育迟缓，DNA合成受损，免疫功能 缺陷，及诱发皮肌炎等疾病，目前的研究进一步显示与锌相关一些酶在缺氧，血管 生成，细胞增殖和肿瘤转移中扮有重要角色，表明其在肿瘤的发生发展中起到至 关重要的作用。 近几十年来，尽管国内外在前列腺癌发病机制方面进行了广泛的临床和实验 研究，然而其发病机理还不是很清楚。目前研究普遍认为与其他软组织相比较， 前列腺组织具有特异性的聚集高浓度锌的能力，此聚集高浓度的锌离子功能是由 前列腺组织外周带具有高度特异性的腺分泌上皮细胞所完成的而总所周知前列腺 的外周带是前列腺癌的最好发部位。近50年的研究已经一致表明J下常前列腺外周 正常前列腺组织相比，前列腺癌组织中锌浓度下降达66．5％，而与正常前列腺外周 带相比，锌含量下降了70．85％，同时研究也发现在前列腺癌发生的早期，组织 的锌已经开始下降，而近期又有多个研究显示在在胆囊癌，肝癌及前列腺癌患者 的血液中锌离子办显著下降，因而推测锌在前列腺癌的发生发展中有可能起到很 重要的作用。 新近发现的与锌调节相关的两种锌转运蛋白家族，一个是由SLC30基因编码 锌离子转出细胞或促使锌进入细胞内的囊泡从而降低细胞内锌的浓度，而锌铁调 控蛋白(ZRT，IRT．1ike protein，ZIP)家族主要功能是将锌离子转入细胞内或促进 囊泡内锌的释放增加细胞内锌的浓度，两者共同作用维持细胞内锌离子的稳定。 锌铁调控蛋白与许多恶性肿瘤的进展有关，其在乳腺癌和胰腺癌进展中作用已经 是ZIP家族的一个新成员，由SLC39A4基因编码合成，其在肠道锌的吸收和囊泡 中锌的释放中起到重要的作用。研究显示ZIP4的表达缺失与肌皮炎相关，其过表 达与胰腺癌的发生有着密切关系。但到目前为止，ZIP4在前列腺癌中的作用及其 生物学机制还不是很清楚。 本研究旨在明确ZIP4在前列腺癌组织中表达情况，并通过体外实验探讨其在 前列腺癌发生发展中的作用，为进一步的研究奠定基础。 方 法 基因的表达情况与前列腺癌临床病理特征问的关系，分析ZIP4基因表达的临床意 义。 (1)．免疫组化检测30例前列腺癌和30例前列腺增生组织中ZIP4的表达情况； RT-PCR和Westernblot法检测前列腺组织中ZIP4的 (2)．利用Real．time mRNA和蛋白表达情况； 察ZIP4过表达对前列腺癌DUl45细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。 (1)．MTT法检测ZIP4过表达对DUl45细胞增殖能力的影响； 的影响： 2 3、利用RNA干扰技术，将ZIP4shRNA稳定转染前列腺22RVI细胞，观察 RNA干扰对22RVI细胞增殖，侵袭、迁移能力及MMP．2的影响。 (1)．MTT法检测干扰后22RVl细胞的增殖活性； (2)．Transwell侵袭试验检测干扰后细胞的侵袭能力； (3)．Transwell迁移试验检测干扰后细胞的迁移能力； (4)．Elisa法检测干扰后22RVl细胞MMP．2的分泌水平； 结 果 1、免疫组化检测结果显示ZIP4在前列腺癌组织中表达的阳性率为13％，而 在前列腺增生组织中的阳性率为93．3％，差异显著(P0．05)。Real．timeRT-PCR 及Western