头孢妥仑胆汁排泄的分子机制及其对肝脏转运蛋白调节作用的的分析研究.pdfVIP

头孢妥仑胆汁排泄的分子机制及其对 肝脏转运蛋白调节作用的研究 硕士生姓名： 孟 强 专旨导教师： 刘克辛教授 指导小组： 刘克辛教授 专业名称： 药理学 摘 要 目的：药物转运蛋白在药物体内代谢过程中的重要作用及研究价值越 来越多地受到研究者的关注。Mrp2，Bcrp是位于肝细胞胆管侧膜上的ABC 族转运蛋白，可转运许多内源性物质和外源性物质(如药物)，许多药物也 可调节转运蛋白的表达。头孢妥仑是第四代头孢菌素类抗生素，研究介导 其胆汁排泄的肝脏药物转运蛋白，对预测与头孢妥仑相关的药物间相互作 用及了解p．内酰胺类抗生素的胆汁排泄机制有重要意义；了解药物对药物 转运蛋白表达情况的影响能够使我们更清楚地从转运蛋白分子水平理解 药物的体内动力学变化，从而为临床合理用药提供理论依据和指导。本实 验通过insitu和invivo方法研究参与头孢妥仑胆汁排泄过程的药物转运 蛋白及头孢妥仑口服给药后对肝脏主要转运蛋白表达的影响。 方法：采用肝灌流实验方法，研究头孢妥仑是否经Mrp2、Bcrp或P—gP 的转运：采用RT-PCR和Westernblot实验，考察头孢妥仑对肝脏主要转 rtM))和实验 运蛋白表达的影响：(1)肝灌流实验，设立对照组(头孢妥仑(1 口灌流液和胆汁样品，高效液相色谱法测定样品中头孢妥仑含量，考察实 验组和对照组中肝摄取率和胆汁累积排泄率的差别；(2)大鼠灌胃给药，设 剂量组，每天两次，一周后，取肝脏，提取总RNA，进行RT-PCR反应， 离心法提取膜蛋白Mrp2，运用Westernblot方法测定不同剂量组中Mrp2 蛋白表达的变化，考察其变化是否有剂量依赖性。 结果：(1)肝灌流实验结果表明，实验组和对照组相比，肝摄取率变化 无统计学意义上的差别；在丙磺舒抑制剂组，肝脏灌流25分钟后，大鼠 的头孢妥仑胆汁累积排泄率降低至对照组的43．78％；新生霉素组的胆汁 累积排泄率降至对照组的79．52％；维拉帕米做P．gP抑制剂时，头孢妥仑 的胆汁累积排泄率与对照组相比，无统计学意义上的差别。(2)大鼠灌胃给 予头孢妥仑一周后，Mrp2，Bcrp和Oat2mRNA的表达增多，且100mg／kg 剂量组mRNA表达明显多于l blot与RT-PCR 达减少，与头孢妥仑剂量的增加呈反向变化。(3)Western 结果一致，Mrp2蛋白表达增多，且1 00mg／kg剂量组中Mrp2蛋白表达是 对照组的1．7倍，16mg／kg剂量组中Mrp2蛋白表达是对照组的1．32倍。 结论：(1)Mrp2在头孢妥仑的胆汁排泄过程中起主要作用，Bcrp也参 与其胆汁排泄过程，而P．gp不介导头孢妥仑的胆汁排泄；(2)头孢妥仑可增 blot实验进一步证实了头孢妥仑 且这种调节作用有剂量依赖性；(3)Western 可增加Mrp2的蛋白表达，且有剂量依赖性，为阐述药物间相互作用和临 床合理用药提供了重要依据。 关键词：头孢妥仑 多药耐药相关蛋白2 乳腺癌多药耐药蛋白 mRNA表达蛋白 2 Excretion MolecularMechanismof ofCefditoren Biliary theEffectsofCefditorenonthe Levelsof and Expression HepaticTransporters