电化学活性高分子辅酶衍生物的制备及脱氢酶电化学生物传感器的构筑.pdfVIP

摘要 本文将具有电化学活性的二茂铁基团(Fc)和生物活性的烟酰胺酰嘌呤二核 苷酸(辅酶NAD+)同时连接到具有生物相容性的水溶性高分子聚乙烯亚胺(PEI) 的骨架上，合成了电化学活性高分子辅酶衍生物PEI．Fc．NAD。 紫外和红外光谱表明二茂铁和辅酶NAD+被固定到高分子骨架上。利用紫外 分光光度法对其生物活性进行了表征，结果表明，连接到高分子骨架上的NAD+ 分子具有生物活性，其酶促反应符合米氏方程，但动力学米氏常数比自由状态的 辅酶NAD+高。 利用循环伏安法和计时安培法研究了PEI．Fc-NAD在溶液状态和固定化状态 下的生物电化学特性。实验中选用了两种脱氢酶，乙醇脱氢酶(ADH)和L广赖 method，LBL)和聚乙二醇(PVA)包埋两种固定化方法将酶固定化， adsorption 构筑了相关脱氢酶电化学传感器。实验结果表明，PEI．Fc．NAD无论是溶液状态 下还是固定化状态下均具有生物电化学活性，可以实现脱氢酶与电极之间的电子 传递。 通过U儿法分别构筑了乙醇脱氢酶和L赖氨酸脱氢酶修饰电极，它们均对 底物表现出特征电化学响应，而且通过改变多层自组装膜的层数可以有效控制修 饰电极的电流响应值。PEI．Fc—NAD与脱氢酶之间的静电相互作用使得用此方法 得到的修饰电极具有良好的稳定性。 本文合成的电化学活性高分子辅酶衍生物同时具有二茂铁的电化学特性和 辅酶的生物活性，可以在较低的电压下实现辅酶分子的电化学氧化再生，不仅可 以实现脱氢酶和电极之间的电子传递，而且易于固定化，为无试剂化脱氢酶电化 学生物传感器的构筑提供了通用平台。 关键词：电子媒介体；辅酶氧化；电化学；电子传递：脱氢酶生物传感器 Abstract Inthis molecular derivative paper,electroactivehigh weightcoenzyme bothferroceneandnicotinamide (PEI—Fc—NAD)waspreparedbyattaching groups adenine a dinucleotide(coenzyme，NAD+)to polyelectrolyte，polyethylenimine(PEI)． and wereboundtothebackboneofthe Theferrocene coenzyme polymer, groups of was whichwas UV-VisandIR．The PEI—Fc·NAD provedby bioactivity characterized itwasfoundthattheattached exhibited UVoVis，and by NAD+goups reactionwasinaccordancewithMichaelis·Menton enzymatic bioactivity．The Km thanthat NAD+． the islittle fornature equation，but larger bioelectrochemicalcharacteristicsofPE