钙调神经磷酸酶及锌指转录因子在大鼠钙化主动脉中的作用.pdfVIP

中文摘要 钙调神经磷酸酶及锌指转录因子在大鼠 钙化主动脉中的作用 摘 要 目的：血管壁上钙过量沉积称为血管钙化。动脉粥样硬 化、慢性肾功能衰竭、糖尿病、高血压等疾病过程中均有血 管钙化，其程度与疾病的严重性呈正相关，并随年龄的增长而 逐渐恶化。心血管系统钙化包括动脉内膜(动脉粥样硬化相 关钙化)、动脉中层(Monckeberg’S 钙化，无论发生在哪个部位，都会引起血流动力学和机械力 学的改变，并增加卒中和猝死的危险。近几年冠状动脉钙化 对于心血管事件的预测价值备受关注，较无钙化者，任何程 度的冠状动脉钙化整体相对危险度为4．3，3～5年冠心病事件 (心肌梗死或心源性死亡)增加4倍。深入研究血管钙化的 发病机制，预防、延缓或逆转血管钙化的发生，具有重要的 临床意义。 目前研究表明，血管钙化是由细胞和分子参与的、类似 于骨形成的主动过程。许多因素都参与了这一过程的调节。 近年证实钙调神经磷酸酶(CaN)是丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸 酶家族成员，主要表达于细胞浆中，组织分布广泛，通过使 底物NFATs去磷酸化和核内转位，激活下游基因包括锌指 转录因子(GATA．6)等的转录，参与多种细胞功能调节。 一定作用。CaN及GATA．6是否参与血管钙化的调节过程， 目前国内外尚未见有相关报道。 中文摘要 本试验采用华法令和维生素D3建立大鼠血管钙化模 型，测定主动脉CaN mRNA、蛋白质的表达及活性和 GATA．6 mRNA、蛋白质的表达，并观察CaN特异性抑制 m 剂环孢霉素A(CsA)对CaNmRNA、蛋白质及GATA一6 RNA、蛋白质的表达及对血管钙化的影响，初步探讨CaN、 GATA一6对血管钙化的调节作用，为临床防治血管钙化提供 新的思路。 方法：4wSD雄性大鼠36只，体重80--一，909，随机分 为3组，每组12只。A组：对照组；B组：钙化组：C组： 环孢霉素A组；实验第1．8天，各组均给予维生素K。 15mg-kg一·d-l，皮下注射。同时，c组另给予环孢霉素A 10mg·kg-1．d一腹腔注射；A组和B组分别给予等量生理盐水 腹腔注射。第3天开始，B、C组另给予维生素D， 在相同时间给予等量生理盐水皮下注射。实验第9天，所有 动物麻醉后处死。开胸，暴露出心脏，分离胸主动脉，并向 下剖开腹部，分离出腹主动脉，从主动脉根部至腹主动脉分 1、GATA．6 叉处剪下主动脉。取材后每组各取6只用于CaNB mRNA、GATA．6 免疫组化染色、CaNAa mRNA原位杂交 测定和透射电镜下观察超微结构的变化；6只用于碱性磷酸 酶(ALP)活性测定。将免疫组织化学和原位杂交结果应用 Plus图象分析软件，分别计算各组主动脉组织相 Image．Pro 同面积内阳性细胞的累积光密度值(integrated opticdensity， 13．0 IOD)。所有数据以均数士标准差(i土s)表示，运用SPSS 统计软件，首先对计量资料进行正态性检验及方差齐性检 中文摘要 验，组间资料比较应用单因素方差分析，两两比较应用 LSD．t检验，P0．05即有统计学意义。 结果：(1)HE染色结果示：对照组大鼠主动脉壁结构完 整，中层血管平滑肌细胞(VSMCs)排列整齐；钙化组和 环孢霉素A组大鼠主动脉中层VSMCs排列紊乱，弹力纤维 迂曲断裂。(2)透射电镜下可见钙化大鼠主动脉内皮细胞呈 空泡变性，线粒体水肿，嵴数量减少，