STGC3基因高表达对Daudi细胞系生长增殖影响地.pdfVIP

前 言 Burkitt 氏淋巴瘤（Burkitts lymphoma ）是一种严重威胁人们健康与生命的 B 淋巴细胞来源的恶性肿瘤，首先在黑人群体中发现，以非洲疟疾流行地区的 [1-3] 儿童为多见，近年来研究证实，Burkitt 氏淋巴瘤在爱滋病患者中发病率较高 ， 其病因可能与病毒感染、免疫缺陷、基因突变等有关。Epstein-Barr 病毒(EBV) 是引起人类传染性单核细胞增多症的病因,并与人类恶性肿瘤如鼻咽癌、淋巴瘤 [4,5] 及霍奇金氏病的关系非常密切 。 淋巴瘤的发生发展是一个多基因参与、多因素作用、多阶段的复杂病理过程 与结果。近来，分子肿瘤发病学研究表明，Burkitt 氏淋巴瘤的发生与细胞遗传 学改变密切相关，以少数染色体异常为特征，常表现为染色体易位。迄今已从 分子水平识别出多种淋巴瘤基因异常，包括因染色体易位、畸变及缺失，导致 原癌基因的激活与抑癌基因的失活。虽然众多科研工作者进行了大量的研究，但 Burkitt 氏淋巴瘤发生发展的确切分子机制，目前仍然未能完全阐明，至今未能 鉴定与其癌变相关的特异性致病基因。开展肿瘤相关基因的研究，对阐明Burkitt [11-17] 氏淋巴瘤形成机制具有十分重要的意义 。 STGC3 基因是本实验室在鼻咽癌高频率LOH 位点3p21 区域，所克隆的一 个与鼻咽癌相关的新基因（GenBank 登录号为AY078383 ）。该基因cDNA 全长 1271bp，定位于染色体3p21 ；开放阅读框为438bp ，编码一个由146 个氨基酸组 成，分子量为 16kDa 的蛋白质，蛋白质定位于细胞浆及细胞核；蛋白质预测分 析，STGC3 蛋白质的等电点9.96，分子量约为16.3430 kDa，属于亲水蛋白，富 含亮氨酸和丝氨酸，含有一个糖基化位点，一个蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点, 一 个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点，三个肉豆蔻酰化位点，一个层粘连蛋白 G 结构域 (Laminin G domain)[18] 。 在前期研究中，运用Northern 杂交、RT-PCR 等方法检测STGC3 的表达。 结果发现STGC3 mRNA 在正常鼻咽组织表达，而在原发性鼻咽癌组织和鼻咽癌 细胞系中表达下调；将 STGC3 基因重组到 pcDNA3.1 真核表达载体上，导入 6 CNE2 细胞系，然后观察肿瘤细胞生物学行为的改变，结果发现 STGC3 高表达 后CNE2 细胞的生长速度明显减慢；利用蛋白质组学相关技术研究发现，STGC3 基因高表达，能引起鼻咽癌细胞系CNE2 蛋白质表达谱的改变，使CNE2 细胞系 CyclophilinA、α-烯醇酶、nm23 等蛋白表达上调，hnRNP F 、Thioredoxin 等蛋白 表达下调, 而这些蛋白质的表达改变涉及细胞凋亡、基因转录调控、细胞免疫等。 上述结果表明该基因与鼻咽癌的发生密切相关，它可能是一个鼻咽癌候选抑瘤 [19] 基因 。 我们的前期研究结果还显示：STGC3 基因在鼻咽癌及多种肿瘤细胞系中存 在表达下调。MTETmArray2 72 组织膜Northern blot 杂交结果显示：STGC3 基 因在正常人多种组织中均有表达，而在8 种肿瘤细胞系杂交信号均较弱；尤其是 Burkitt 氏淋巴瘤 Daudi 细胞系杂交信号最弱，推测 STGC3 基因表达下调，可 能参与了淋巴瘤发生发展[20] 。 Daudi 细胞系是一个来源于 Burkitt 氏淋巴瘤的肿瘤细胞系[21-29] 。为观察 STGC3 基因表达上调后，对 Daudi 细胞系生物学特性的影响，本研究在前期工 作的基础上，将已构建好的pCDNA3.1(+)/STGC3 真核表达载体，应用电穿孔基 因转染技术，将STGC3 基