HBcAg对健康人和乙肝病毒携带者外周血单个核细胞刺激产生IFN-α影响地.pdfVIP

第1章前言 因此，本实验设计将HBV抗原系统中具有最强T淋巴细胞刺激表位，免疫 原性最强的HBcAg通过腺病毒转染外周血单个核细胞将其导入细胞内表达，以 观察健康人与乙肝病毒携带者固有免疫反应通过TLR9产生IFN．a的差异。同 ODN 2006单独或协同腺病毒刺激外周血单个 时，使用人TLR9的天然配体CpG 核细胞，观察其IFN．a产生情况。通过实验观察乙肝病毒携带者在固有免疫识 别环节中与健康人相比是否发生变化，为研究乙肝病毒突破或逃避人体固有免 疫的监控形成持续性慢性感染的机制及固有免疫与慢性乙型肝炎致病机理及免 疫治疗提供了新思路。 第2章材料与方法 第2章材料和方法 2．1研究对象及筛选标准 2．1．1研究对象 月南昌大学第一附属医院接诊乙肝病毒携带者10名男性，年龄20．35岁，平均 年龄26岁，其中5名为慢性HBV携带者，5名为非活动性HBsAg携带者。 同时选择南昌大学第一附属医院接诊健康体检者lO名男性，近期无细菌、 病毒等微生物感染，其中5名乙肝五项示HBsAb阳性、5名乙肝五项全阴。 2．1．2筛选标准 。 一、入选标准： (1)年龄在20．50岁之间； (2)诊断符合慢性乙型肝炎防治方案诊断标准：慢性HBV携带者，血清 HBsAg和HBV DNA 低于检测阈值(103copies／mL)，ALT在正常范围。 二、排除标准： (1)合并甲肝、丙肝、戊肝及HIV等其他病毒感染者； (2)近2周有明显的感染，血常规及肝功能不正常者： (3)自身免疫性肝炎或代谢性肝病者； (4)严重的活动性疾病及慢性病(如明显心、脑、肾病、糖尿病、神经精 神疾病等)； (5)有酗酒、吸毒、药物滥用者： (6)筛查前6个月内使用核昔(酸)类似物、干扰素及其他免疫调节剂、细 胞毒性药物、免疫抑制剂者。 所有病例均在南昌大学一附院行酶联免疫吸附试验检测HBsAg、抗-HBs、 第2章材料与方法 化指标检测。所有病例及健康人研究对象均签署知情同意书，表示愿意参加实 验项目。 表1研究对象临床基本资料 HBV DNA‘：定义103copies／mL为阴性，103copies／mL为刚性。 2．2实验材料 2．2．1基本材料 玻璃培养瓶、试管、2毫升冻存管(CORNING)、1．5ml离心管、O．5ml Ep管、 1．5ml EP管、Pipetman 10毫升玻璃移液管、封口膜、耐酸手套、乳胶手套、移液球(红色1毫升、蓝 管、1000ml量筒、翻塞、滤器、橡皮塞、酒精灯、试管架、记数器、记号笔、 细胞计数板(XB．K．25)、盖玻片、铝制饭盒。 2．2．2实验试剂 (1)人淋巴细胞分离液solarbio 200ml(rlbxbfly．200) 1640solarbio (2)RPMI 500ml(31800．500) Bovine (3)10％胎牛血清Fetal GIBCO) micron BufferedSaline，7．2(0．1 (4)PBS液Phosphate