杧果畸形病病原菌营养体亲及性探究.docVIP

杧果畸形病病原菌营养体亲及性探究摘要：【目的】为了解我国杧果畸形病病原菌Fusarium mangiferae的营养亲和性及营养亲和群类型，【方法】以采自四川攀枝花市和云南华坪县等不同地区和不同杧果品种的38个畸形病病原菌为材料，在含KClO3 培养基上诱导筛选。【结果】共获得抗氯酸盐、不能还原利用硝酸盐营养突变体（nit）455 株，通过MM、NM、HM 等3种不同氮源培养基划分出nit A、nit B、nit C、nit D 4种突变类型，其中nitA出现频率最高，占总体的78.02%；nit B 和 nit C其次，分别占 7.91%和13.63%；nitD 最少，仅占0.44%。采用nit 突变体互补型配对技术，将获得的突变菌株进行配对培养，测得不同的营养体亲合群（VCGs）数为5 个，其中VCG1内包含30个菌株，3个菌株分布在VCG2内，VCG3和VCG4内各含有2个菌株，菌株MG33单独形成VCG5。【结论】我国杧果畸形病病原菌存在丰富的营养亲和群类型，分析发现F. mangiferae 的营养亲和群种类和杧果品种、地理来源间无明显相关性。 关键词： 杧果畸形病； nit突变体； 抗氯酸盐突变体； 营养亲和群 中图分类号：S667.7 文献标志码：A 文章编号：1009-9980 01206-1092-05 杧果畸形病俗称簇生病、簇芽病，是一种危害杧果正常生长的世界性病害，植株感病后嫩芽、花序簇生，不能正常开花坐果，给生产造成严重的经济损失。畸形病在世界各杧果主产国普遍发生，国内该病主要分布在云南、四川海拔较高的杧果晚熟地区[1-4]。Summanwar1966年首次从畸形病株成功分离出串珠镰刀胶孢变种Fusarium moniliforme var. subglutinans，并且用柯赫氏法则证明此菌为致病菌，随着科学技术与生产的发展，研究人员陆续发现该病均是由镰刀菌（Fusarium spp.）引起的，大都属于Gibberella fujikuroi类群，且F. mangiferae （起初被鉴定为F. moniliforme和F. moniliforme var. subglutinans）的地理分布最广[5-7]。然而在畸形组织中还检测到其他能致病的镰刀菌种类，已报道的主要有F. sterilihyphosum、F. equiseti、F. pallidoroseum、F. proliferatum和F. oxysporum等[8-10]。Zheng等[11]采用硝酸盐营养突变体互补型配对技术测定了多国杧果畸形病原F. subglutinans的营养体亲和群类型，74个菌株分属于7个，3个VCGs仅在一个国家发现，营养亲和群变化最大的分别是埃及和美国。至今国内杧果畸形病主要致病菌F. mangiferae存在的营养体亲和群种类未见报导，我们对F. mangiferae硝酸盐突变体进行了筛选并对营养体亲和性进行了研究，旨在利用nit硝酸盐突变体技术，分析不同杧果品种分离的菌株、不同地理来源分离的菌株的抗氯酸盐突变体和nit突变体的诱发规律，并对菌株进行营养体亲和群（VCGs）的划分。 1 材料和方法 1.1 供试菌株 从我国杧果畸形病发病区（四川攀枝花市和云南华坪县）采集簇生芽和簇生花序。采用常规组织分离法分离。将病组织表面消毒后，置于PDA平板上28 ℃恒温培养。对形态学上初步鉴定为F. mangiferae的分离物利用特异性分子检测技术进行种级鉴定，最终确定F. mangiferae分离物，具体方法参考文献[10]。获得镰刀菌38个，其编号及其来源列于表1。 1.2 供试培养基 含氯酸盐培养基（KPS）：去皮马铃薯200 g，蔗糖10 g，KClO3 30 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL。 KPS培养基用于nit突变株诱导，MM、NM和HM培养基用于nit突变株的鉴别，MM培养基用于亲和性配对测定。 1.3 诱变nit突变株和突变型鉴别 诱变nit突变体：各供试菌株在PDA上培养4 d后，在菌落边缘利用灭菌的打孔器打下直径为5 mm的菌饼，移植于KPS培养基平板上，每个皿均匀接种3个点，接种7个皿，25 ℃黑暗培养，以诱导nit突变株形成。5 d后开始观察，在受抑制生长的菌落边缘出现呈快速生长的扇形区即为角变区，用接种针在角变区挑取少许菌丝移植到MM平板上。如生长出的菌落无气生菌丝，菌丝稀薄，即可认定为nit突变体，每个突变体重复3次。将各nit突变体转移到MM培斜面上保存，供营养体亲和性测定。 nit突变体类型鉴定：分别把突变体移植到MM，HM及NM 3种培养基上，25 ℃培养3～4 d，每处理重复3次。根据突变体在3种培养基上的生长情况，把筛