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第一章基因工程的基的础知识与基本技能1
第一章 基因工程的基础知识与基本技术;一、基因工程的基本知识
(一)基因的结构特点
结构基因
调节基因
启动子(promoter)
终止子(terminater)
增强子(enhancer) ;1、原核生物基因的结构特点
大多为结构基因,很小一部分为调节基因;
具有转录单元,形成多顺反子mRNA ;(1)操纵子(operator)结构
指原核生物DNA上,一系列在作用上密
切相关而排列在一起的结构基因和操纵基因的总
和,是原核生物的一个遗传单位。
;(2)原核生物mRNA的特征
半衰期短 、 具多顺反子形式
存在SD序列:起始密码子AUG上游7-12个
核苷酸处有一保守序列,可与16srRNA 3’端反向互
补,此序列称为SD序列。 5-AGGAGGU-3
作用:核糖体-mRNA结合过程中起作用。;(3)原核生物基因的终止子特点
存在富含有GC碱基的二重对称区。
RNA易形成RNA-RNA发卡结构,破坏一
部分RNA-DNA杂交链。
存在一段由4-8个A组成的序列
3’端为寡聚U,则杂合链的易出现不稳定的rU·dA区域;终止子对转录的终止;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;2、真核生物基因的特点
(1)不连续性
;(2)内含子
I型自我剪接内含子 II型自我剪接内含子 Ⅲ型内含子
真核rRNA 核mRNA、tRNA 核内前体mRNA
蛋白质内含子(intein):是蛋白质中的一段多肽链, 它靠自我剪切的方式从前体蛋白中分离出来, 而两端的外显肽(extein)以肽键的方式相连。
翻译内含子(translational intron):mRNA中存在与内含子对应的核苷酸序列,在翻译过程中这序列被“跳跃”过去,因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列。;(3)外显子
mRNA剪接方式不同,产生了mRNA多态性。
组成型剪接(constitutive splicing):
选择性剪接(alternative splicing):;(4)连接区(exon-intron junction sequence)
连接区序列高度保守,剪接过程重要的识别序列
GT-AG法则:多数内含子5’端起始的两个碱基都是GT,而3’端最后两个碱基总是AG,由于这两对碱基的高度 保守性和广泛性,则把它称为GT-AG
法则。
;(5)重复序列
卫星DNA:染色体DNA经氯化铯密度梯度离心,其高度重复序列因组成不同而在主带旁自成一条或数条条带。
小卫星DNA(VNTR,串联重复序列可变数):D短重复单位6-40bp,重复6-100次,常位于非编码区,分布广泛。
微卫星DNA(STR,简单串联重复):重复单位长度通常为2-6个核苷酸单位,重复6-60次。
中度重复序列:
Alu元件:属于非自主的逆转录转座子,人类基因组内的拷贝数可达140万个,占基因组的10%以上. ;(二)从DNA到蛋白质
1、中心法则与反中心法则; RNA的编辑:
mRNA序列发生了
不同于模板DNA的变
化,使翻译生成的蛋白
质的氨基酸组成,不同
于基因序列中的编码信息。;2、基因表达(gene expression)
转录(transcription):
翻译(translation):
基因表达调 控( gene regulation
/gene control):;;;1)原核生物的基因表达
a.原核生物启动子:;b.乳糖操纵子与调控系统;lac体系受调控的证据
lac体系的“开-关”特性
;;;关于负控诱导的几点说明;代谢产物活化蛋白(CAP),又称为cAMP受体蛋白,能够与cAMP形成复合物;cAMP-CAP复合物可以结合到乳糖操纵子的启动基因上,可以促进转录的进行。
则:正调控因子为: cAMP-CAP复合物;CAP;关于正调控???几点说明;(2)真核生物的基因表达;类别II基因启动子的结构(共有):
核心元件:包括转录起始位点(initiator,INR)和
TATA区。
转录起始子:转录起始(+
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