36种中草药提取物对烟草赤星病菌抑制作用.docVIP

36种中草药提取物对烟草赤星病菌抑制作用 36种中草药提取物对烟草赤星病菌的抑制作用 烟草赤星病的病原是链格孢菌[Alternaria alternate（Fries） KEissler]，该病主要发生在大田生长后期[1]，是危害中国烟草生产的一种重要真菌性病害[2，3]。贵州省主要烟区分布在兴义、威宁、六盘水、毕节、大方、遵义等地。烟草赤星病的流行对烟叶产量及质量产生严重影响，降低了烟叶商品的市场竞争力，常常给烟叶的生产带来巨大的经济损失。目前防治烟草赤星病的有效措施主要是化学防治，但是由于长时间使用化学合成农药，不仅破坏了生态环境，而且还增加了烟叶的农药残留毒性。 　中国中草药资源丰富，目前已发现有杀菌活性的植物约有1 400余种，且发现在对人体致病菌有抑制作用的中草药中，有些对植物病原菌也有很好抑制作用[4]。在小麦上，卢巴子、鸡冠花和月季花等7种中草药的乙醇提取物对小麦赤霉菌有明显的抑制作用，其中鸡冠花的抑菌率达100%[5]。丁香的丙酮提取液对小麦赤霉病菌和小麦纹枯病菌抑制率为100%，虎杖对小麦赤霉病菌和小麦纹枯病菌抑制率均在80%以上[6]。目前，已有很多关于中草药抑菌方面的研究，但是在烟草赤星病上的报道较少。为此，本试验选取36种药性各异的中草药分别进行微波法和水蒸气蒸馏法提取，采用生长速率法对其提取物进行室内抑制作用测定，旨在筛选出有效防治烟草赤星病的中草药，为生产提供理论依据。 　1 材料与方法 　1.1 材料 　1.1.1 供试菌种 烟草赤星病菌于2014年6月在清镇市烟草基地采集典型病株，在贵州大学农学院植物病理实验室分离纯化保存。 　1.1.2 供试中草药 2014年7月购于贵阳市花果园鑫发药业。 1.2 方法 　1.2.1 提取物制备 　1）微波法。中草药于45 ℃条件下烘干，用粉碎机粉碎，过40目筛，准确称取10 g溶于100 mL去离子水中，浸泡振荡30 min，置微波中火（450 W）5 min，冷却至室温，重复一次，两层滤纸抽滤，滤液于旋转蒸发仪中50 ℃减压浓缩，在常温下定容至10 mL，即浓度为1 g/mL。4 ℃储存备用。 　2）水蒸气蒸馏法。中草药于45 ℃条件下烘干，用粉碎机粉碎，过40目筛，准确称取10 g溶于50 mL去离子水中，浸泡30 min，置于水蒸气蒸馏装置中反应30 min，收集其蒸馏物，于4 ℃储存备用。 　1.2.2 中草药提取物的抑菌作用试验 采用生长速率法测定中草药提取物对烟草赤星病菌菌丝生长的抑制作用[7]。将中草药提取液与PDA培养基以1∶9的比例混匀后倒入培养皿，每个药液3次重复，以去离子水为对照。用5 mm的打孔器沿着菌种同一个圆周打孔，用接种针小心将供试菌种接到含药培养基上，菌丝面朝下，每皿一块。于25 ℃恒温箱中培养7 d。用十字交叉法测量菌落直径，取平均值，计算抑制率。 　相对抑制率=■times;100% 　（注：处理菌落直径为减去原菌饼直径5 mm后的值） 　1.2.3 中草药提取物室内毒力测定 将抑制率在70%以上的中草药提取液浓度合理划分为3.125～50.000 mg/mL共5个梯度，每个浓度梯度3次重复，以去离子水为对照。按照“1.2.2”中的接种及培养方法，测量其直径，计算抑制率。 　1.2.4 数据处理及分析 将生长抑制率转换成抑制机率值，用药剂浓度的对数和抑制机率值计算毒力回归方程、抑制中浓度（EC50）及相关系数R，采用Excel和DPS处理相关数据。 　2 结果与分析 　2.1 中草药提取物对烟草赤星病菌的抑制作用 　中草药微波法提取物对烟草赤星病菌的抑制作用结果见表2。由表2可知，36种中草药提取液对烟草赤星病菌均有不同程度的抑制作用。抑制作用最好的是黄连和雄黄，抑制率分别为91.15%和76.72%；抑制率在60%以上的还有桑寄生、甘草和白果；还有6种提取液抑制率在50%以上。 　中草药水蒸气蒸馏法提取物对烟草赤星病菌的抑制作用结果见表3。36种中草药提取物对烟草赤星病菌均有不同程度的抑制作用。大黄、七叶一枝花和肉桂的抑制率分别为69.93%、68.14%和63.07%。其余除白豆蔻之外的抑制率均在50%以下。其中肉豆蔻的提取液对烟草赤星病病菌菌丝生长有促进作用。 　2.2 中草药提取物对病菌的室内毒力测定 　根据中草药提取物对烟草赤星病菌抑制效果分析，可知微波法提取的黄连和雄黄提取液对烟草赤星病菌的抑制率在70%以上。对这两种提取物进行了室内毒力测定。结果如表4。由表4可知，在微波法中提取物浓度梯度在3.125～50.000 mg/mL时，黄连提取物的抑制率在30.71%～84.82%的范围内波动。而雄黄在相同的浓度范围内，抑制率为17.68%～42.68%。二者提取物抑制率均伴随着浓度的升高而增大。不同的是，雄黄的抑