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5-HT 沙眼衣原体K血清型感染细胞IL-6分泌水平测定 　 作者： 张雄鹰 查国章 武延隽 余平 【关键词】 沙眼衣原体 摘 要 目的:探讨沙眼衣原体K血清型感染细胞IL-6分泌水平及其意义。 方法 :用ELISA双抗体夹心法检测沙眼衣原体感染细胞培养上清IL-6水平的变化。结果:沙眼衣原体感染McCoy细胞在沙眼衣原体感染后36h、48h、60h、IL-6分泌量分别为1.3655±0.0046、2.9601±0.0104、4.0408±0.0722，均显著高于相应的对照组（Plt;0.05），并且随感染时间的延长IL-6分泌水平显著地逐步增高（Plt;0.05）。结论:沙眼衣原体K血清型感染可诱导McCoy细胞分泌IL-6，并且呈时间依赖性。 关键词 沙眼衣原体;McCoy细胞;白细胞介素-6 毕业论文 沙眼衣原体（Ct）的致病机制涉及机体的免疫防御和免疫病理反应，白细胞介素6（IL-6）作为重要的炎症因子和免疫介导因子可能参与沙眼衣原体感染的致病过程。据报道，Ct能诱导体外培养的上皮细胞、人单核细胞、淋巴细胞等多种细胞产生IL-6等细胞因子 ［1，2］ ，而有关沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞分泌细胞因子的报道尚少。本文检测沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞分泌IL-6水平，旨在为寻求衣原体感染性疾病的防治措施及进一步的 研究 提供 参考 。 1 材料 沙眼衣原体K血清型由中山医科大学宁波教授惠赠，McCoy细胞由湘雅医学院病毒研究室惠赠，IL-6ELISA试剂盒（晶美公司产品），RPMI-1640（GIBCO产品）。 2 方法 2.1 衣原体增殖 论文代写 取一瓶单层McCoy细胞，弃上清，加1mL衣原体悬液至培养瓶中，3000r/min离心1h，37℃、5%CO 2 培养箱培养2h，弃上清。加无双抗的RPMI-1640培养基（含10%小牛血清、1μg/mL放线菌酮），置37℃、5%CO 2 培养箱培养48h取出，冻融，500g离心10min，取上清（含衣原体），分装于无菌 毕业论文 小试管，70℃冰箱保存备用。 2.2 衣原体滴定 将增殖后的衣原体作系列稀释，接种于已经形成McCoy细胞单层的24孔培养板，培养48h，用荧光标记的抗衣原体单克隆抗体染色后于荧光显微镜下计数感染细胞百分率，并 计算 ID50值。 2.3. ELISA检测IL-6含量 在已形成McCoy细胞单层的24孔培养板中接种1ID50衣原体，并设正常细胞对照，3000r/min离心1h，37℃、5%CO 2 培养箱培养2h，弃上清。每孔加含10%小牛血清的RPMI-1640培养基1mL，37℃、5%CO 2 培养箱培养。于36h、48h、60h分别取培养上清，用ELISA双抗体夹心法检测IL-6含量（按试剂盒使用说明书操作）。在酶标仪上用405nm波长测OD值。将试剂盒提供的IL-6标准浓度与测得的OD值经SPSS统计软件做标准曲线，得出回归方程，根据样本的OD值计算其IL-6含量。 　　 2.3 统计学处理 毕业论文 实验结果用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较用单因素方差 分析 ，显著性差异以Plt;0.05为准。 　 3 结果 3.1 标准曲线 将IL-6标准品含量与测得的OD值用SPSS统计软件处理获得IL-6含量标准曲线（见图1），得出回归方程为:Y=1.9505+0.5967LnX（Y为OD值，Ln是以e为底的 自然 对数，X为IL-6浓 度）。 图1 IL-6含量标准曲线 3.2. ELISA双抗体夹心法检测IL-6的浓度 论文代写 结果见表1、图2。Ct感染后36h、48h、60h细胞培养上清中IL-6的含量均显著高于相应的对照组（Plt;0.05），且随感染时间的延长IL-6含量显著地逐步增高（Plt;0.05）。 表1 沙眼衣原体感染McCoy细胞分泌IL-6 *与对照比较Plt;0.05，△与36h Ct组比较Plt;0.05，▲与48h Ct组比较Plt;0.05 图2 沙眼衣原体感染McCoy细胞分泌IL-6的ELISA检测结果 论文代写 3 讨论 IL-6为具有广泛生物学效应的细胞因子，具有双向免疫调节作用，也是机体炎症反应和一系列病理生理过程的重要介质。近年 研究 表明，Ct的致病机制与机体的免疫防御和免疫病理过程有关。细菌的脂多糖、病毒RNA、感染产生的中介物质均能刺激感染细胞及免疫细胞产生IL-6。李海燕等报道，沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中IL-6水平升高，IL-6水平与Ct的亚临床感 毕业论文 染或持续性感