CHK1及CHK2在食管癌组织中表达.docVIP

CHK1及CHK2在食管癌组织中表达 　【摘要】 目的 观察CHK1和CHK2在食管癌和癌旁不典型增生组织中的表达及其与食管癌单纯放疗疗效的关系。方法 采用Western Blotting方法检测33例胃镜活检标本诊断为食管鳞癌以及12例癌旁不典型增生组织中CHK1和CHK2蛋白表达，分析单纯放疗的疗效及预后相关因素。结果 33例食管癌组织和12例癌旁不典型增生组织中CHK1和CHK2蛋白表达量均无明显差别(P＞0.05)。33例食管癌病人单纯放疗后1年生存率为61.44%，中位生存期11.5个月；单因素分析显示年龄、食管造影X线病变长度、CT扫描显示病变长度、临床T分期、N分期、近期疗效以及临床分期均与食管癌放疗预后有关（P＜0.05）；COX多因素分析仅临床分期为独立预后因素；而食管癌组织中CHK1和CHK2表达对预后无明显影响（P＞0.05）。结论 CHK1和CHK2不能作为判断食管癌放疗预后的指标，而临床分期则是影响食管癌单纯放疗疗效的主要因素。 【关键词】 食管癌 细胞周期检测点激酶 放疗 预后 　　0 引言 　　细胞周期检测点激酶1和2（CHK1和CHK2）是生物进化过程中非常保守的蛋白激酶，在DNA损伤引起的细胞周期检测点调节中有着非常重要的作用。CHK1和CHK2在多种人正常和肿瘤组织中均有表达，并可能与某些肿瘤的发生发展有关[1]。食管癌组织中CHK1和CHK2表达情况如何，尚未见报道。为此应用Western Blotting方法检测食管癌组织及癌旁组织中CHK1和CHK2蛋白表达，分析其对单纯放疗疗效的影响，现将结果报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 病例入组条件 　　①收集2003年11月～2004年7月在河北医科大学第四医院放疗科诊治的食管癌初诊患者33例；② 内窥镜下在病灶及不碘染区多点取材，病灶及不碘染区处分别诊断为鳞癌和不典型增生者入组；③放疗前行胸部CT扫描和食管钡餐造影X片以及腹部超声波检查，疗前及疗中常规行血液学检查；④疗前KPS评分均≥70分，无严重心脑血管疾病和放疗禁忌症；⑤ 所有患者均接受单纯根治性放疗，疗前、疗中和疗后未行辅助性治疗。 　　1.2 一般资料 　　33例食管癌中，男22例、女11例，男∶女为2∶1；中位年龄60岁（37～82岁）。病变部位：颈段2例、胸上段8例、胸中段18例、胸下段5例。食管造影X线片显示病变长度：≤3.0cm者5例、3.1～5.0cm者9例、5.1～8.0cm者12例、＞8cm者7例；X线病理分型：髓质型29例、溃疡型和缩窄型各2例。CT扫描显示病变长度：≤3.0cm者4例、3.1～5cm者8例、5.1～8cm者12例、＞8cm者9例。按照祝淑钗[2]提出的非手术治疗食管癌分期标准，T分期：T1 3例、T2a 12例、T2b 13例、T3a 2例、T3b 2例、T4 1例；N分期：N0 13例、N1 9例、N2 11例；M分期：M0 31例、M1 2例；临床分期：Ⅰ期2例、Ⅱa期7例、Ⅱb期7例、Ⅲa期7例、Ⅲb期5例、Ⅵ期5例。 　　1.3 放疗 　　常规放疗组于模拟机下定位，以食管病变中心为射野中心，给予一前野加两后斜野避开脊髓照射。适形放疗组先行热塑体模固定体位，标记三维激光灯参考点以保证治疗重复性。以CT扫描模拟定位，层厚3cm，应用三维适形放射治疗计划系统（CMS公司）进行扫描图像的数字化传输、三维重建，勾画肉眼可见的病灶靶区（包括原发肿瘤和转移淋巴结GTV），一般上下两端外扩3.0cm，前后左右外扩1.5cm作为临床靶区（CTV），通常给予3个共面或非共面照射野，计算靶区周围重要脏器剂量分布，确认治疗计划给予肿瘤最高致死剂量的同时确保周围正常组织受照不超过耐受剂量。常规分割照射2Gy/d，5次/周，肿瘤总剂量50～70Gy，中位剂量60Gy。 　　1.4 食管癌组织中CHK1和CHK2蛋白表达的检测 　　收集33例食管癌标本和12例癌旁不碘染标本分别提取组织蛋白(组织蛋白裂解液由河北医科大学法医教研室提供)，考马斯亮蓝法（南京建成生物工程研究所）蛋白定量后，12%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，湿法电转印至PVDF膜上，依次经5%脱脂奶粉封闭、一抗CHK1和CHK2（美国Santa Cruz公司，按1∶300稀释）4℃过夜、辣根过氧化物酶（HPR）标记IgG（1∶2 000稀释）37℃孵育1h，DAB（北京中杉生物技术公司）显色。扫描后用凝胶分析软件分析，以光密度值代表蛋白的相对表达量。 　　1.5 统计学处理 　　采用SPSS11.5统计分析软件对结果进行统计分析。计量资料采用t检验，生存分析采用KaplanMeier方法，单因素分析采用Logrank检验，多因素分析采用COX比例风险回归模型。 　　2