HPLC法测定复方益母口服液中水苏碱含量.docVIP

HPLC法测定复方益母口服液中水苏碱含量 　【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定复方益母口服液中水苏碱的含量。方法 以Kromasil C18 (5 μm，250 mm×4.6 mm)为色谱柱，乙腈0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（体积比18∶82，pH值5.5）为流动相，流速1.0 mL·min-1，柱温35 ℃，检测波长215 nm，以外标法进行检测。结果 水苏碱进样量在1.00～25. 00 μg范围内具有良好的线性关系，r=0.999 7，样品平均加样回收率为98.1% (n=9)，RSD为1. 17%。结论 本方法简便，结果准确可靠，重复性好，可作为控制该制剂质量的方法。 【关键词】 水苏碱 复方益母口服液 高效液相色谱法 益母草是一种传统的妇科良药，性味辛、苦，微寒，具有活血化淤、调经利水之功效，常用于妇女月经不调、痛经、难产，以及跌打损伤、水肿和疮疡肿毒等症。现代药理研究发现，益母草中益母草碱、水苏碱等多种活性生物碱也具有改善心肌缺血、增加冠状动脉血流、提高心功能，抑制血小板聚集、抗凝、抗血栓形成等多种作用，且作用持久［1］。 　 　　复方益母口服液是由益母丸（中国药典1977年版）改剂型而成，其中的主要有效成分水苏碱是益母草中生物碱类含量测定的指标性成分，文献报道多采用紫外分光光度法、薄层扫描法和高效毛细管电泳法进行测定，不仅操作过程繁琐、所需时间长，而且水苏碱在湿度大时的稳定性不理想［2-5］。本文应用高效液相色谱法测定复方益母口服液中主要有效成分水苏碱的含量，方法简便，结果准确可靠，重现性好，可作为控制该制剂质量的方法。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　 　　Agilengt 1200 系列高效液相色谱系统（Agilent Co. Ltd.，USA）：G1376A高效液相泵，G1367B自动进样器，G1316A柱温箱，G1365B多波长UV检测器，Hystar色谱工作站。 　　1.2 试药 　　 　　水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110712200508）；复方益母口服液（山东省临沂银雀山制药厂，10 mL·支-1，批号：2008211、2008423、2008512）；乙腈（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯（山东禹王化学试剂有限公司）。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　 　　色谱柱:Kromasil C18 (5 μm，250 mm×4.6 mm，天津琛航科技仪器有限公司提供)；流动相:乙腈0. 05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（体积比18∶82，pH值5.5），流速:1.0 mL·min-1，检测波长:215 nm，柱温:35 ℃，进样量:10 μL。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　 　　精密称取105 ℃干燥至恒重的水苏碱适量，置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得0.5 mg·mL-1的对照品溶液［6］，摇匀，备用。 　　2.3 最大吸收波长的选择 　　 　　采用岛津UV160紫外分光光度计，对甲醇配制的0.5 mL·min-1的对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行扫描，于215 nm处有一个最大吸收特征峰，故选择为检测波长。 　　2.4 阴性对照溶液的制备 　　　　 　　取不含益母草的阴性对照品，按生产厂家提供的生产工艺以及供试品溶液配制方法制备。 　　2.5 供试品溶液的制备与测定方法 　　 　　各批号复方益母口服液以0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，分别精密量取续滤液2.0 mL，置10 mL容量瓶中，加入甲醇制成供试品溶液，进样10 μL。同时取对照品溶液10 μL进样，分别测定峰面积，按外标法计算样品的含量。 　　2.6 系统适用性试验 　　取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液，分别进样，结果水苏碱的保留时间为6.075 min，理论塔板数为6 800，与相邻峰的分离度大于1.5，符合中国药典的规定。阴性对照图谱在水苏碱色谱峰的保留时间处无明显吸收峰，表明处方中其他成分对水苏碱的测定无干扰，见图1。 　　A.对照品溶液;B.阴性对照溶液;C.供试品溶液 　　图1 HPLC色谱图（略） 　　Figure 1 HPLC chromatograms 　　2.7 标准曲线与线性范围 　　 　　取对照品溶液，分别进样2.0、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0 μL，记录其色谱峰的峰面积。以峰面积对进样量作图，绘制标准曲线，结果水苏碱回归方程：Y=978.2 X+21.4，r=0.9997，线性范围：1.00～25.00 μg。 　　　2.8 稳定性试验 　　取同一批供试品溶液（批号2008423），分别于0、2、4、8、12、24 h测定水苏