HPV16 E7及Brn3a在宫颈癌前病变中表达及其意义.docVIP

HPV16 E7及Brn3a在宫颈癌前病变中表达及其意义 　【摘要】 目的 研究 HPV16 E7和Brn3a在各级宫颈癌前病变（CIN）中的表达情况以及两者之间的关系，从分子生物学水平探讨其作为宫颈癌前病变的特异性标志物的可能性，以期寻找新的宫颈癌前病变筛查 方法 。方法 对71例患者行宫颈薄层细胞学检查（Thinprep Cell Test，TCT），并在阴道镜下组织学活检，其TCT残留标本，用RTPCR法检测各标本中HPV16 E7和Brn3a的表达。结果 HPV16 E7和Brn3a表达按细胞学分级和病 理学 分级其阳性率呈逐级增高趋势，差异均有显著性（Plt;0.0001）。两者作为宫颈癌前病变和HPV活化状态的诊断标志物，其结果是一致的（P＜0.05）。结论 TCT残留标本适合进行RTPCR 分析 研究。HPV16 E7可作为宫颈癌前病变和HPV活化状态的生物标志物。Brn3a可作为可靠的CIN3生物标志物和HPV致癌基因转录活化的标志物。HPV16 E7和Brn3a相互作用，可能为宫颈高度癌变 发展 的原因之一。 论文代写 【关键词】 宫颈癌前病变;TCT;HPV16 E7;Brn3a;RTPCR Significance of HPV16 E7 and Brn3a Expression in Cervical Neoplasia Key words：Cervical neoplasia; TCT; HPV16 E7; Brn3a; RTPCR 宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，居女性肿瘤死亡原因的第三位。据统计 [1]，每年有大约3.7万人发病，发病率以每年2%～3%的速度增长，与近年来宫颈癌的早期检出率增高及发病年轻化有关。在发达国家，宫颈癌的发病率已明显下降，这在很大程度上归功于对癌前病变的早期诊断和 治疗 。因为从宫颈癌前病变发展成宫颈癌，有一个较长的过程，大约需5～10年，在此期间加强宫颈防癌检查，尽早发现异常症状，采取有效的治疗方案，可积极防止宫颈癌前病变发展为癌。本实验利用新柏氏薄层液基细胞涂片检查（ThinPrep cell test,TCT）的残留标本，进行RTPCR检测，测定标本中16型人乳头瘤病毒致癌蛋白E7（HPV16 E7）和细胞转录因子Brn3a的mRNA表达情况，从分子学水平探讨宫颈癌前病变中高危型人乳头瘤病毒（HRHPV）致癌基因活化情况，以及Brn3a和HPV16 E7作为宫颈上皮内癌变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）的生物标志物的特异性。 论文代写 1资料和方法 1.1临床资料 选取2004年8月～2004年11月在重庆医科大学附属第一 医院 行宫颈TCT检查的71位患者，年龄21～63岁，平均36.8岁，所有患者在取样前均未接受任何妇科相关疾病的治疗，用宫颈刷刷取宫颈细胞并洗入TCT保存液中备用。 1.2方法 1.2.1收集细胞标本 用RNase的离心管吸取1ml TCT残留标本底层沉积物，离心后弃上清，沉淀用PBS液洗2次，离心后去上清，-20℃保存备用。 1.2.2RTPCR法（检测HPV16 E7及Brn3a mRNA的表达） 论文代写 TCT残留标本的总RNA提取参照Trizol试剂盒操作程序进行。逆转录采用TaKaRa公司的AMVRT酶，方法按说明书进行。HPV16 E7基因引物设计参照 文献 [2]。上游引物：5′ AGCTCAGAGGAGGAGGATGA3′ ，下游引物：5′GGTTTCTGAGAACAGATGGG3′，预计扩增片段长度为203bp；Brn3a基因引物设计参照文献[3]，上游引物：5′GTCGACATGGACTCGGACACG3′，下游引物：5′AGCCCCCTCAGTAAGTGGCA3′；内对照βactin基因引物设计参照文献[4]，上游引物：5′ACACCTTCTACAATGAGCTG3′，下游引物：5′CTGCTTGCTGATCCACATCT3′，扩增片段长度为828bp。PCR反应条件为94℃预变性5min；94℃ 45s，58℃ 45s，72℃ 45s，共30个循环；72℃再延伸，10min。取PCR产物5μl，1.5%琼脂糖凝胶电泳（80V，40mA，60min）。紫光灯下观察摄像。 1.3统计学分析 论文代写 分析细胞学分级和病理学分级，各组HPV16 E7和Brn3a的mRNA的阳性表达情况，比较两者在宫颈表达中的关系，并进行χ2检验。 2结果 论文代写 2.1细胞学和病理学诊断结果 见表1。表171