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β内酰胺类抗生素对L1型金属β内酰胺酶稳定性及酶动力学研 　 【摘要】 目的 通过比较9种β内酰胺类抗生素对L1型金属β内酰胺酶(金属酶)的稳定性及酶动力学参数，了解金属酶L1的酶学特性。方法 制备金属酶L1的纯化产物，以紫外分光光度计测定9种β内酰胺类抗生素对L1型金属酶的稳定性及酶动力学参数。结果 重组L1酶水解青霉素及碳青霉烯类抗生素的能力接近，氨曲南及头孢他啶对L1酶高度稳定。结论 L1酶的稳定性及动力学研究为指导临床合理应用抗生素提供了 科学 的理论依据。 【关键词】 β内酰胺类抗生素； L1型金属酶； 稳定性； 酶动力学 ABSTRACT Objective To investigate the stability of βlactams to L1 metalloβlactamase and its enzyme kinetic parameters. Methods The L1 fusion protEin was expressed and purified from the recombinant E.coli. The stability and kinetic parameters of 9 βlactams to L1 were detected by spectrophotometer. Results Recombinant L1 showed the similar hydrolyzing capacity to penicillin and carbapenems, but highly stable against aztreonam and ceftazidime. Conclusion The stability and enzyme kinetics of 9 βlactams to L1 metallo βlactamase provided a guideline for the clinical use of antibiotics. KEY WORDS βlactams; L1 metallo β lactamase; Stability; Enzyme kinetic 嗜麦芽寡养单胞菌是一种条件致病菌，主要感染免疫力低下或长期大量使用广谱抗生素者。该菌以往在临床上并不常见，但近10年来，由它引起的感染逐渐增多，已成为临床院内感染的重要致病菌之一。产生L1型金属酶是嗜麦芽寡养单胞菌对β内酰胺类抗生素耐药的重要原因。在本实验的前期工作阶段，通过聚合酶链反应从临床分离的嗜麦芽寡养单胞菌710株的基因组中扩增得到编码L1酶的全基因产物，并将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)中克隆表达，得到重组菌MBL20［1］。本实验中，将重组菌表达的L1融合蛋白进行纯化，并测定9种β内酰胺类抗生素对L1酶的稳定性及动力学参数，以了解L1型金属酶的酶学特性，现将结果报道如下。 毕业论文 1 材料与方法 论文代写 1.1 药品与试剂 青霉素G(penicillin G，PCG，华北制药集团)；头孢呋辛(cefuroxime，CXM，深圳制药厂)；头孢唑林(cefazolin，CEZ，西南药业股份有限公司)；头孢他啶(ceftazidime，CAZ，Glaxo公司)；亚胺培南/西司他丁(imipenem/cliastatin，IMP，美国Merck SharpDohme药厂)；美罗培南(meropenem，MRP，日本住友制药株式会社)；氨曲南(aztreonam，AZ，上海施贵宝制药有限公司)；氨苄西林(ampicillin，ABPC，山东鲁抗医药有限公司)； 头孢噻肟(cefotaxime， CTX， HoechstMarion Roussel公司)；Nitrocefin为英国Glaxo研究所产品。 二甲基胂酸钠(sodium cacodylate)为上海生工公司产品。 论文代写 1.2 菌株 毕业论文 产L1型金属酶的重组菌株MBL20。 1.3 仪器 超声细胞破碎仪(宁波新芝仪器厂)；5408R型台式高速冷冻离心机(Eppendorf公司)；UV120型紫外分光光度计(日本岛津公司)；气浴恒温振荡器(Edmund Bhler公司)。 毕业论文 1.4 L1融合蛋白的表达及纯化 毕业论文 挑取含重组质粒的大肠埃希菌BL21(DE3)单菌落接种于2ml含25mg/L卡那霉素的LB肉汤中，37℃过夜培养，然后按1∶100的比例转入新鲜LB肉汤，于37℃ 250r/min振荡培养至A600=0.6时，加入异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)，使其终