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丛生丝孢酵母菌生物学特性 　【关键词】 ,丛生丝孢酵母菌 【关键词】 丛生丝孢酵母菌；生物学鉴定 　　1实验资料 　　200309从我院1例无痛性血尿患者尿液中分离出一种酵母样菌，经鉴定确认为丛生丝孢酵母菌（Trichosporon pullulans, T.pullulans）［1］. 无菌操作下将菌接种于沙氏琼脂平皿及沙氏肉汤培养基上，35℃, 25℃分别孵育24, 48, 72, 96, 120 h和6 d，观察菌落生长情况. 将上述48 h培养菌落用接种针接种于玉米粉小培养基中，盖无菌盖玻片置无菌平皿中，加无菌湿纱布保温，35℃孵育48 h，直接在显微镜下观察生长形态. 将待检菌落，用接种环直接接种于含有碳源和氮源等生化鉴定反应管中，以葡萄糖作为对照管，置35℃孵育箱反应24~48 h，观察结果. 挑取待鉴定真菌与无菌蒸馏水制成混悬液，划线接种于含有放线菌酮的沙氏琼脂培养基上，接种量为一接种环. 另接种1管不含放线菌酮的沙氏琼脂培养基作为对照. 置25℃培养3 d，观察结果. 结果判定： 两管均有生长判为阳性，表示对放线菌酮不敏感，能耐受. 有放线菌酮的斜面无生长或比对照管生长差，判为阴性，表示对放线菌酮敏感. 将待检菌接种于沙氏琼脂斜面后，将斜面置室温（25℃）培养5 d或更长时间直至菌落形成，检查菌落形成和显微镜下形态，如为霉菌相生长判为阳性. 药物敏感性试验（微量稀释法） 按照 1995年NCCLS推荐的酵母菌微量稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案进行. 抵抗力试验包括： ① 对温度耐受性试验；② 干燥试验；③ 紫外线照射试验. 另用9 g/L盐水制成菌悬液，并调整其浊度为0.5麦氏单位，取500 μL菌悬液，注入小鼠腹腔内，观察其侵袭力. 本菌24～48 h培养菌落，经革兰染色后呈阳性，大小为5～9 μm，孢子呈圆形、卵圆形或长圆形，菌丝块内可见芽生孢子，无子囊及子囊孢子. 沙氏琼脂生长菌落灰白色，表面光滑，呈小米粒状. 培养48 h后，菌落开始为酵母样薄膜生长，大小为2～3 mm，灰白色，随后在中央出现细毛刺样菌丝，后乳白色菌丝覆盖菌落，背面呈淡棕色. 72 h后菌落迅速增大，表面放射沟纹状有皱褶，颜色呈深棕色，边缘呈纤毛状. 1 wk后菌落开始变黑，中心有颗粒状突起，有腐酸味. 25℃培养5 d后在沙氏琼脂培养基上出现霉菌相菌落. 沙氏肉汤中呈菌膜和沉淀生长. 同化试验阳性的糖类有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、阿拉伯糖、海藻糖、棉子糖、密二糖、纤维二糖、松三糖；同化试验阴性的糖醇类有乳糖、半乳糖、卫矛醇、核糖醇、山梨醇、肌醇. 不分解尿素，还原硝酸盐. 应用VITEK微生物自动分析仪YBC卡鉴定为丛生丝孢酵母菌（鉴定概率＞95%，鉴定生物编码为437311354）. 本菌为耐受放线菌酮真菌（为双相型真菌）. 在沙氏琼脂培养基上25℃培养5 d后，镜下出现霉菌相. 在BHIA培养基上37℃培养24 h后，镜下出现酵母相. 该菌对氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑均敏感，最低抑菌浓度分别为2.0, 0.25, 0.125, 0.06 mg/L. 本菌对温度、干燥、紫外线有一定耐受力. 60℃ 1 h, 100℃ 5 min可杀死菌丝和孢子;在干燥箱中60℃ 10 min, 100℃ 5 min可杀死菌丝和孢子;紫外线有效照射5 min可将90%菌丝和孢子杀死. 本菌侵袭力较弱，对正常小鼠一般不引起疾病，小鼠接种菌液后10 d未发生明显的病理体征；组织病理结果显示，心、肝组织无明显病理改变，对肺、肾组织有轻微的病理变化，组织内酵母相呈细胞内感染. 　　2讨论 　　丛生丝孢酵母菌是一种酵母样真菌，属于半知菌亚门，芽生菌纲，隐球酵母菌目，隐球酵母菌科，丝孢酵母属. Bergey’S细菌学鉴定手册第九版分类归毛孢子菌属，称出芽毛孢子菌［2］. 我们的实验结果显示，该菌为双相型真菌，在48 h培养经革兰染色后呈阳性. 菌落形态35℃ 24 h培养，菌落灰白色，表面光滑，呈小米粒状，培养48 h后，菌落开始为酵母样薄膜生长，随后在中央出现细毛刺样菌丝，后乳白色菌丝覆盖，背面呈淡棕色. 72 h后菌落迅速增大，呈深棕色表面放射沟纹状有皱褶 ，边缘呈纤毛状. 在沙氏肉汤中呈现霉菌所特有的菌膜和沉淀生长. 在玉米粉琼脂小培养基上，用倒置显微镜观察，有较多的大小不等圆形和卵圆形孢子，营养菌丝较多，似倒置的树枝，可见到不分枝的粗短菌丝. 25℃培养5 d菌落形态和镜下形态为霉菌相生长. 对大部分糖类同化试验阳性，不分解尿素，还原硝酸盐. 对氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑均敏感. 对温度、干燥、紫外线有一定耐受力. 侵袭力较弱，对正常小鼠一般不引起疾病，对肺、肾组织有轻微的病理变化. 我们的实验结果为今后对丛生丝孢酵母菌的实验室