中华眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡.docVIP

中华眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡 　 作者：刘成军，韦世秀，李牡艳，吴华，李佳荃 【摘要】 　　目的探讨中华眼镜蛇毒（Chinese cobra venom）对体外培养的人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株诱导凋亡的作用。方法应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感实验法（ATP-TCA）测定细胞的生长抑制百分率，倒置相差显微镜、HE染色观察细胞形态学改变，流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率。结果ATP-TCA实验显示眼镜蛇毒对体外培养的NACC细胞生长有明显的抑制作用，与浓度和作用时间呈正比；形态学观察发现用药后的NACC细胞质空泡、核固缩、核染色质聚集等形态学变化现象；流式细胞仪检测发现眼镜蛇毒阻滞NACC细胞生长于细胞周期的G0／G1期，检测到实验组细胞凋亡率显著高于对照组。结论中华眼镜蛇毒能抑制NACC细胞增殖，诱导NACC细胞凋亡。 【关键词】 中华眼镜蛇毒 NACC细胞株 细胞周期 细胞凋亡 　　Abstract：Objective To study on the effect of Chinese cobra venom-induced apoptosis in Noovel Human palatal salivary gland cells line. MethodsThe adenosine triphospate(ATP)-bioluminescence tumor chemosensitivity assay (ATP-TCA) was used to examine the growth of NACC cells treated with Chinese cobra venom in different concentration.Cell apoptosis was observed by flow cytometry and cell morphology. ResultsThe experiment showed that cobra venom could obviously inhibit the growth of NACC cell in a concentration and time-dependent manner.The changes in morphology of NACC Cell were observed by HE staining. The flow cytometry analysis showed that apoptosis and inhibition of NACC cells in the G0/G1 phase were induced after treated with Chinese cobra venom. The apoptotic rates of NACC cells treated with Chinese cobra venom groups were significantly higher than that in control group. ConclusionCobra venom can inhibit proliferation and induce apoptosis of NACC cells. 　　Key words：Chinese cobra venom; NACC cell; Cell cycle; Cell apoptosis 　　涎腺腺样囊性癌是最常见的涎腺恶性肿瘤之一，研究有效药物控制其复发和转移成为目前研究的热点。中华眼镜蛇毒中成分复杂，其主要成分有神经毒素、细胞毒素、酶、蛋白质及多肽等。具有多方面的药理作用，如抗炎、抗血小板聚集、镇痛、抗肿瘤等。随着蛇毒毒理学、药物学、生物化学和分子生物学的发展，近年来国内外学者越来越重视蛇毒抗肿瘤作用的研究。据报道眼镜蛇毒在体内体外都具有抗肿瘤作用［1～3］。而眼镜蛇毒对NACC细胞株的作用如何，国内外尚未见报道。在本研究中，我们尝试应用近年发展起来的对恶性实体肿瘤有较高可评估率的新方法三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感实验法（ATP-TCA法）［4］，研究眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株的抑制作用，测定眼镜蛇毒与癌细胞存活的量效和时效关系，应用HE染色观察眼镜蛇毒作用NACC细胞后细胞形态学的改变，以及流式细胞术检测眼镜蛇毒作用后的NACC细胞凋亡等方面的实验，为眼镜蛇毒的抗肿瘤临床应用提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品与仪器 　　中华眼镜蛇毒冻干粉（广西医科大学蛇毒研究所）；ATP试剂盒［德国DCS公司，包括：完全分析培养基（CAM）、ATP提取液、荧光素-荧光酶、稀释缓冲液、ATP标准品