丹芪合剂及依那普利对糖尿病大鼠肾小管HGF及SnoN表达影响.docVIP

丹芪合剂及依那普利对糖尿病大鼠肾小管HGF及SnoN表达影响 　 作者：李晓颖，郭兵，刘瑞霞，肖瑛，石明隽，王圆圆，皮明婧，张国忠 【摘要】 　　目的观察丹芪合剂和依那普利对糖尿病大鼠肾小管HGF和SnoN表达的影响。方法SD大鼠随机分为4组：正常对照组（N组），糖尿病组（D组），中药丹芪合剂治疗组（Y组），依那普利治疗组（E组）。采用链脲佐菌素尾静脉注射（55 mg/kg）的方法复制糖尿病模型。生化方法测血糖、24 h尿蛋白、血肌酐、甘油三酯、胆固醇，并计算肾脏指数。HE染色光镜检查肾组织形态学变化。免疫组化观察大鼠肾脏SnoN、HGF、TGF-β1、FN蛋白表达情况，Western blotting检测大鼠肾脏SnoN、HGF、TGF-β1蛋白的表达。结果①D组肾脏指数、血糖、24 h尿蛋白、血肌酐、甘油三酯、胆固醇较N组明显升高；Y组和E组与D组大鼠相比，血肌酐、24 h尿蛋白量及甘油三酯显著降低。②D组大鼠出现明显的肾脏形态学改变，Y组和E组明显改善。③免疫组化和Western blotting结果显示：D组大鼠SnoN和HGF较N组明显降低，Y组和E组明显高于D组；D组TGF-β1和FN明显高于N组，Y组和E组则较D组明显下降。结论丹芪合剂和依那普利可能通过促进HGF生成，从而抑制TGF-β1的产生，以及促进SnoN表达进而抑制TGF-β1/Smad信号通路，使糖尿病肾病得到改善。 【关键词】 糖尿病肾病； 肝细胞生长因子； SnoN； 丹芪合剂； 依那普利 　　糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病（diabetic mellitus, DM）最常见的严重并发症之一 ，发病机制复杂，治疗也很困难，最终发展为终末期肾衰竭（ESRD），严重威胁人类健康。转化生长因子β1（transforming growth factor beta1, TGF-β1）是目前公认的与肾脏肥大和肾间质纤维化密切相关的细胞因子，通过下游Smads通路发挥作用。近年来研究发现［1］，转录共抑制因子SnoN是TGF-β1/Smad信号通路重要的负性调节因子，它可与Smads蛋白相互作用，抑制TGF-β1靶基因的活化，从而调控TGF-β1的生物效应。我们近期的研究表明［2］，DN时SnoN蛋白的表达明显降低，对TGF-β1/Smad信号通路的负调控作用减弱，从而促进DN的发生发展。据报道［3］，肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）为内源性的肾脏保护因子，在肾小管上皮细胞中可介导SnoN生成，从而抑制TGF-β1/Smad信号通路，减缓肾纤维化进展。我们以往的研究表明［4，5］，丹芪合剂和依那普利对肾纤维化有一定的治疗作用，但其作用机制未充分阐明。本研究旨在观察丹芪合剂和依那普利是否通过调节肾小管HGF、SnoN的表达而起到改善DN的作用。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药物和试剂链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)购自Sigma公司；血糖、肌酐、甘油三酯、胆固醇检测试剂盒购自迈克公司，尿蛋白检测试剂盒购自南京建成公司；兔抗鼠SnoN多克隆抗体购自SantaCruy公司；兔抗鼠HGF、TGF-β1和FN多克隆抗体，β-acting单克隆抗体，免疫组化SABC试剂盒，辣根过氧化物酶标记的二抗，ECM显色试剂盒均购自武汉bostor公司，DAB显色剂，SP试剂盒购自北京中杉金桥公司；Western印迹所用PVDF膜、3 mm Whatman滤纸购于美国milli-pore公司；依那普利，扬子江制药厂生产；丹芪合剂为丹参、黄芪、生地黄等中药的自制提取液。 　　1.2 器材美国强生血糖仪；高速低温离心机（Beckman公司）；核酸蛋白分析仪（Amersham公司）；电泳系统及电转移装置（Amersham公司）；凝胶成像系统（美国Bio-RAD公司）。 　　2 方法 　　2.1 动物及分组雄性SD大鼠48只，体质量180～220 g，购于上海实验动物中心。随机分为4组，每组12只：正常对照组(N组)、糖尿病组(D组)、糖尿病丹芪合剂治疗组(Y组)和糖尿病依那普利组(E组)。用0.1 mmol/L，pH 4.0 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液将链脲佐菌素(STZ)配成5%的溶液，D组、Y组、E组按55mg/kg的剂量单次尾静脉注射，N组大鼠尾静脉注射0.2 ml等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。48h后尾静脉采血测量空腹血糖值，大于或等于16.7者为糖尿病大鼠模型。除N组外所有动物全部成模。各组大鼠均喂食颗粒饲料，自由饮自来水，成模第2日起，Y组大鼠给予丹芪合剂灌胃1.8 g/（kg·d），E组大鼠依那普利灌胃2 mg/（kg·d），N组