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人工假体周围骨溶解基因治疗探究进展 　【关键词】 人工假体周围骨溶解 　　虽然全髋置换术是临床上治疗严重髋关节疾病的有效手术方法，但术后出现的人工假体周围骨溶解引起假体无菌性松动仍然是影响人工假体使用寿命的主要原因之一。过去许多研究表明在磨损颗粒刺激下可以激活破骨细胞，诱导骨重吸收。目前人工假体周围骨溶解还不能通过非手术治疗得到很好的预防和治疗，必须进行全髋关节翻修手术治疗。随着分子生物学的发展，越来越多的科学工作者从不同的角度对人工假体周围骨溶解进一步深入地研究，尤其是基因治疗方面的研究。基因治疗作为近年来兴起的一种治疗方法，可在分子水平进行调控，从而为延缓或逆转疾病进程提供了新的可能性。本文就目前人工假体周围骨溶解的基因治疗的研究现状及进展进行综述。 1 与磨损颗粒诱导骨溶解有关的细胞因子 目前认为假体周围骨溶解引起人工假体无菌性松动是由于磨损颗粒积聚达到一定浓度后刺激人工假体周围的组织巨噬细胞表达细胞因子，如白介素1（IL1β）、白介素6（IL6）、肿瘤坏死因子（TNFα）、骨保护素配体（OPGL）或称为核因子KB受体激动剂配体（RANKL）等细胞因子〔1〕。大量体内和体外实验均表明，TNFα和IL1β对于破骨细胞的前体的聚集和分化为成熟的破骨细胞起着重要的作用。在TNFα、IL1β作用下形成表达核因子κB受体激动剂（RANK）的巨噬细胞，然后在成骨／基质细胞产生的巨噬细胞集落刺激因子（MCSF）和RANKL协同刺激下形成成熟的破骨细胞，也就是说在假体周围组织中有一部分巨噬细胞的前体细胞可以分化为具有骨重吸收功能的破骨细胞〔2、3〕，在界膜磨损颗粒异物反应中，RANKL阳性的成纤维细胞可以替代成骨细胞，与RANK阳性的巨噬细胞相互作用。RANKL阳性成纤维细胞／成骨细胞和RANK阳性的单核/巨噬细胞之间的接触使巨噬细胞的前体细胞向多核巨细胞和破骨细胞分化〔4〕。RANKL／RANK相互作用受到OPG的抑制，OPG是可溶性诱饵受体可结合并中和RANKL，事实上在界膜中血管内皮细胞是产生OPG主要细胞，并且远离RANKL／RANK相互作用活跃的组织。由于大量RANK阳性的巨噬细胞聚集，局部RANKL表达为上调的成纤维细胞。在这种OPG减少而RANKL增加的环境下促使多核异物巨细胞和破骨细胞的形成〔5〕。一般认为TNFα和IL1主要通过调节OPG／RANKL/RANK系统来影响假体周围骨溶解。但是Sabokar〔6〕等研究发现，阻断RANKL诱导破骨细胞形成途径时，细胞因子MCSF和TNFα足以诱导破骨细胞的分化，TNFα和IL1之间也可以协同促进骨溶解，提示当假体周围大量磨损颗粒聚集时，炎性细胞因子也可能不通过OPG／RANKL／RANK系统直接诱导骨溶解。 2 无菌性松动中的基因治疗 21 基因治疗的动物模型 基因治疗的先决条件是可以模拟人类疾病的病因和疾病特点的实验动物模型。无菌性松动常用的实验模型有大鼠、兔、犬、绵羊〔7~11〕，然而，对于基因治疗的研究来说这些动物模型确实存在某些缺点，因为一旦人工假体与宿主骨整合达到可靠固定后，出现类似于临床上的无菌性松动需要花费很长时间。Pap G〔7〕等对大鼠实验模型进行改进，增加每周5 d每天2 h的活动量。尽管机械负荷的增加促进了假体周围界膜的形成，但是6个月之后无明显假体松动的迹象。迄今为止，有两种动物实验模型被用于研究磨损颗粒诱导的无菌性松动生物学病因和基因治疗，并且排除了机械力学方面的影响。一种是建立可以定量测定骨吸收程度的小鼠airpouch动物模型，即将磨损颗粒于即将来源于同系基因BALB／c小鼠的股骨或颅盖骨的骨片作为供体植入异体的airpouch中，在小鼠皮下间隙注入磨损颗粒可以诱导炎性反应结果形成类似于假体周围界膜样组织〔12、13〕。另一种动物模型是将磨损颗粒直接植入小鼠颅盖骨。在1周内，磨损颗粒就可以诱导剧烈的炎症反应，观察到明显的破骨细胞形成和骨溶解现象〔14〕。采用TNF和RANK基因缺陷的小鼠也证实了磨损颗粒诱导骨溶解的原因是由于炎性细胞因子有关〔15、16〕。而且类似的研究也表明TNFR：Fc和RANK：Fc融合蛋白注射入野生型小鼠抑制了磨损颗粒诱导的骨溶解，预示着基因治疗在无菌性松动中的前景〔16、17〕。 22 腺病毒载体在抑制磨损颗粒诱导的骨溶解中的应用 腺病毒（Adenovims）为DNA病毒，它能感染各时相的细胞，感染滴度高且不与宿主基因发生整和，因而被较广泛地应用于研究。虽然腺病毒是基因治疗的良好载体，但其表达时间短，容量小（45 kb），且免疫原性强，缺乏理想的动物模型来进行临床前毒性研究，这使得腺病毒作为基因治疗的载体具有一定的危险性。Childs 〔18〕等采用小鼠颅盖骨动物模型研究腺病毒载体可溶性肿瘤坏死因子抑制剂