复方贞术调脂胶囊水提液絮凝澄清工艺探究.docVIP

复方贞术调脂胶囊水提液絮凝澄清工艺探究 　【摘要】 目的优选复方贞术调脂胶囊水提液最佳絮凝澄清工艺。方法采用正交实验法，以丹酚酸B、总多糖、总酚酸含量及总固体得率为指标，考察壳聚糖用量、药液浓度及pH值对絮凝澄清工艺的影响。结果壳聚糖用量对丹酚酸B、总多糖、总酚酸的含量及总固体得率有显著性影响(F lt;0. 05)，药液浓度、pH无显著性影响。结论生药∶药液= 1∶3,，pH=4.0，壳聚糖加入量为0.24 ml/g生药为最佳絮凝澄清工艺。 【关键词】 复方贞术调脂胶囊; 壳聚糖; 澄清工艺 　复方贞术调脂胶囊为多年临床经验方，用于高脂血症及脂代谢紊乱相关疾病的治疗，疗效显著，已获国家发明专利。该方由丹参、白术、佛手等中药组成，具有健脾益肾、舒肝化痰、理气凉血、祛瘀解毒之功效。前期研究结果显示，丹参、白术、佛手中水溶性组分具有调节血脂，抗脂质过氧化，抗动脉粥样硬化等作用[1～3]。因此，丹参、白术、佛手等药材以水为提取溶剂进行提取，但在有效成分被提取出的同时，大量水溶性杂质也被提出。为去除杂质，富集有效成分，提高制剂的稳定性，在前期实验研究确定采用壳聚糖絮凝法精制的基础上，本实验进一步采用正交实验法，以丹酚酸B、总酚酸、总多糖含量及总固体得率为指标，优选最佳的絮凝澄清精制工艺条件。 　　1 仪器与试药 　　DIONEX ultimate3000(德国);UV-1101型分光光度计(上海天美);RE-52AA旋转蒸发器(上海嘉鹏科技有限公司);BS423S型电子分析天平(北京赛多利斯);KQ-250型医用超声波清洗机(昆山超声仪器有限公司，功率250W)。壳聚糖(上海华凯科技贸易公司);原儿茶醛对照品(110810-200205，供含量测定用)，丹酚酸B对照品(111562-200706，供含量测定用)均购自中国药品生物制品检定所。 　　2 方法与结果 　　2.1 提取液的制备 按处方量称取丹参、白术、佛手等药材，加水7倍量，提取3次，1 h/次。滤布(50 μm)滤过，浓缩，定容至3 000 ml，作为样品溶液。 　　2.2 壳聚糖絮凝剂的制备称取壳聚糖1 g，加入2%的醋酸溶液100 ml，搅拌，静置24 h，搅拌均匀，配制成1%的溶液。 　　2.3 精制工艺实验根据预实验结果，选出壳聚糖用量、药液浓度、pH值3个试验因素，每因素3水平(见表1)。按 L9(34)正交实验表进行实验安排，在一定温度(50℃)下，加入壳聚糖絮凝剂，搅匀(50r·min-1)，静置，离心，取上清液，定容，作为样品溶液。分别测定各样品溶液中总多糖、总酚酸、丹酚酸B的含量及总固体得率。表1 因素水平 　　2.4 总多糖含量测定 　　2.4.1 葡萄糖标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.055 6 g，加水溶解并定容50 ml量瓶中，制成每毫升含1.112 mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml至50 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取上述各浓度溶液2 ml，分别加入2%苯酚溶液1 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5 ml，摇匀，静置5 min，至沸水浴中加热15 min，取出，快速用冷水冷却至室温。以水为空白，同样显色操作制备空白对照，于紫外可见分光光度计490 nm波长处测其吸光度。以葡萄糖毫克数为横坐标，以吸光度为纵坐标，得回归方程Y =2.8122X+0.140 6，r=0.999 3。葡萄糖在0.022 24～0.133 44 mg范围内与吸光度呈良好线性关系。 　　2.4.2 供试品溶液制备分别精密量取各正交实验所得浓缩液各100 ml，加乙醇使含醇量达85%，静置，滤过，滤渣分别用无水乙醇、丙酮洗涤，干燥，加水溶解并定容至25 ml，作为供试品溶液。 　　2.4.3 稳定性考察精密量取供试品溶液100 μl，置25 ml刻度试管中，按“2.4.1”项下方法操作，测定吸光度，然后每隔30 min测定1次(n=6)，150 min内吸光度基本不变，表明供试品在150 min内基本稳定。 　　2.4.4 含量测定 精密量取各供试品溶液100 μl，置25 ml试管中，按“2.4.1”项下方法操作，测定吸光度，计算总多糖的含量。结果见表2。 　　2.5 总酚酸测定 　　2.5.1 原儿茶醛标准曲线的绘制 精密称取原儿茶醛对照品0.014 22 g于25 ml量瓶中，加水溶解定容至刻度，摇匀，即得。分别吸取原儿茶醛对照品溶液0.5，1，1.2，1.5，2 ml于20 ml量瓶中，分别加入0. 5%亚硝酸钠溶液5 ml，摇匀，放置12 min后，加入10%硝酸铝溶液0. 5 m