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复方降脂缓释片中山楂提取工艺探究 　 作者：史亚军 冯改利 石栋梁 【摘要】 目的筛选复方降脂缓释片中山楂的最佳提取工艺。方法采用正交实验法，以出膏率和金丝桃苷含量两个指标优选提取工艺中的溶剂用量、提取次数、提取时间等因素。结果优化的提取工艺为提取两次，每次加6倍量60%的乙醇，提取1 h/次。结论确定的最佳提取工艺稳定，具有可行性。 【关键词】 复方降脂缓释片 山楂 正交实验 出膏率 金丝桃 　　苷高脂血症的发病率伴随着人们物质生活水平的提高而有升高的趋势，目前降血脂的西药主要是他汀类和贝特类，这类药品长期服用均有一定副作用，而高血脂的治疗则需要长期服药；其副作用表现也较为突出，主要表现有肝毒性，患者消化系统会出现恶心、呕吐、腹泻、消化不良等不良反应，且停药后血脂容易反弹，部分患者出现肌痛或肌无力，从而使部分患者中途放弃。复方降脂缓释片是在遵循安全有效原则基础上，通过大量的文献研究和临床调研、分析大量降血脂处方，筛选出临床应用处方使用频次较高和在降血脂方面有着良好表现的何首乌、山楂和丹参3味药材，对其进行降脂有效部位的提取纯化，再制备成缓释片。本实验对山楂的降脂有效部位进行提取研究。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Waters 600E液相色谱仪；Waters 600泵，Waters 2487紫外检测器；Mill32色谱作站。 1.2 试剂与试药 金丝桃苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号111521－200303），水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯，药材购自咸阳市药材公司。 2 方法与结果 2.1 工艺路线设计山楂中降血脂的有效部位是以金丝桃苷为主的黄酮类化合物。为了最大程度提取和保留有效成分，首先采用一定浓度的乙醇提取有效部位。由于黄酮类成分的稳定性受温度影响较大，在高温长时间加热的情况下会使其分解，温度控制方面既要保证提取率，又要使化学降解率控制在最小范围［2］。一般多以85℃为提取温度。参考相关文献［2］确定影响有效部位的因素为乙醇浓度、提取时间、提取次数和溶剂量。根据预实验和文献资料，乙醇的浓度选取50%，60%，70%3个水平，提取时间选取0.5，1，1.5 h，提取次数选取1，2，3次3个水平，溶剂量选取6，8，10倍3个水平，进行正交实验，以筛选最佳提取工艺。 根据影响有效部位含量的提取条件，对乙醇浓度、提取时间、提取次数、溶剂量进行考察，以金丝桃苷的含量和出膏率为指标，设计4因素3水平正交实验。见表1。表1 因素水平表 2.2 方法与结果称取山楂20 g，共9份，用相应浓度乙醇溶液浸泡30 min，按4因素3水平9次实验的要求用85℃的水浴提取，将提取液过滤后减压浓缩（温度低于85℃），将浓缩液浓缩至一定体积后转移到50 ml容量瓶中，定容，得到1～9号样品，进行含量分析。 　 2.2.1 金丝桃苷的含量测定 色谱条件与系统适用性：色谱柱Kromosil ODS C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），以甲醇－0.1%磷酸（42∶58）为流动相，检测波长为255 nm，柱温为室温。理论板数以金丝桃苷峰计，不低于3 000。在此条件下，样品得到良好分离。缺山楂阴性样品（即溶剂）在金丝桃苷峰处无吸收峰出现，不干扰本品的测定。 线性范围：精密吸取对照品溶液（浓度0.23 mg·ml-1）1，3，5，10，15，20 μl，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积，以峰面积对进样量（μg）回归，得回归方程，A=1 283 962.123C+22 229.572，相关系数r=0.999 7，金丝桃苷在0.23～4.6 μg范围内线性关系良好。 金丝桃苷的含量测定：将1～9号样品各取1 ml，加1 ml甲醇（分析纯）稀释，超声处理5 min，用0.45 μm微孔滤膜过滤，然后按上述色谱条件进行测定。检测结果见表2。 2.2.2 出膏率的测定用移液管从上述50 ml容量瓶中移出20 ml至已于105℃干燥至恒重的蒸发皿中，置水浴上蒸干，于105℃干燥至恒重，测定出膏率（％）。结果见表2。 2.3.3 实验测定结果及分析表2 金丝桃苷的含量及出膏率分析表3 金丝桃苷含量方差分析由表2～3金丝桃苷含量结果分析可知RA﹥RC﹥RD﹥RB，以RB作误差估计，RA，RC，RD分别是RB的6.8927倍，5.350 8倍，2.780 4倍。A，C，D的F值分别为19.158，11.921，3.0。由此可见，乙醇浓度是影响金丝桃苷提取率的主要因素，且有显著性差异。直观分析K值可知，A因素中，K1，K2，K3分别为5.299，8.187，7.288，其中K2最大。C因素中，K1，K2，K3分别为5.988，8.23，6.556，其中K2最大。D因素中，K1，K2，K3分别为7.533，6.3