天胡荽药材中槲皮素薄层鉴别及含量测定.docVIP

天胡荽药材中槲皮素薄层鉴别及含量测定 　 作者：王祥培，许士娜，吴红梅，王婷婷 【摘要】 目的对天胡荽药材中槲皮素进行薄层鉴别，并建立天胡荽药材中槲皮素的含量测定方法。方法采用薄层色谱法对天胡荽药材中槲皮素进行鉴别。并采用高效液相色谱法进行含量测定，色谱柱为Dikma公司Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5μｍ）；流动相为乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）；流速0.8 ml/min。检测波长370 nm，柱温25℃。结果薄层色谱可鉴别槲皮素。槲皮素在0.010 88～0.108 8μg范围内线性关系良好，r=0.999 8，平均回收率为97.77%，RSD=1.00%。结论此法简便、准确，可用于天胡荽药材的质量控制。 【关键词】 天胡荽；槲皮素；薄层色谱法；高效液相色谱法 天胡荽为伞形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioides Lam.或破铜钱Hydrocotyle sibthorpioides Lam.Var.batrachium（Hance）Hand.-Mazz.ex Shan的干燥全草，具有清热解毒、利湿之功效，用于黄疸型肝炎、胆结石、目翳［1］治疗。天胡荽含槲皮素（quercetin）、槲皮素-3-半乳糖苷（quercetin-3-galactoside）等黄酮类化合物［2］，其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变等多种功能［3］，是天胡荽药材的有效成分之一。本实验采用薄层色谱及高效液相色谱对天胡荽药材中槲皮素进行定性与定量研究，为控制天胡荽药材的质量提供简便、有效的方法。 　　1 仪器与试药 Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD)； AB104-N型电子天平(德国Mettler-Toledo Group公司)；薄层色谱硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水；槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100081-200406）；10批天胡荽药材样品采自贵州各地，经笔者鉴定为伞形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioides Lam.和破铜钱Hydrocotyle sibthorpioides Lam.Var.batrachium（Hance）Hand.-Mazz.ex Shan的干燥全草。 　　2 方法与结果 　　2.1 定性鉴别 　　2.1.1 供试品溶液的制备 　　取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约3 g，精密称重，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)提取液75 ml，置水浴中加热回流1 h，滤过，将滤液水浴蒸干，用适量蒸馏水溶解，移至分液漏斗中，加醋酸乙酯30 ml（10，10，10 ml）萃取，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇3ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。 　　2.1.2 对照品溶液的制备 　　精密称取槲皮素对照品13.6 mg，置50 ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 　　2.1.3 薄层色谱法［4］ 　　照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及槲皮素对照品溶液各10 μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）为展开剂，置盐酸蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。 　　2.2 HPLC测定 　　2.2.1 色谱条件 　　色谱柱为Dikma公司Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μｍ）；流动相为乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）；流速0.8 ml/min。检测波长370 nm，柱温25℃。进样量10 μl。理论塔板数按槲皮素计算，应不低于5 000。在此色谱条件下，槲皮素对照品、天胡荽药材的HPLC图谱见图1～2。 　　2.2.2 对照品溶液的制备 　　精密吸取“2.1.2”项下的槲皮素对照品溶液1ml，置25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 　　　2.2.3 供试品溶液的制备 　　取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约0.5 g，精密称重，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)提取液25 ml，称定重量，置水浴中加热回流1 h，放冷，称重，用提取液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5 ml至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm) 滤过，取续滤液,即得供试品溶液。 　　2.2.4 线性关系考察 　　精密吸取槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，进样，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标， 槲皮素进样量为横坐标，进行线性回归分析，线性回归方程: Y=6 442.9X-1.49