抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶单克隆抗体制备及初步鉴定.doc

抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶单克隆抗体制备及初步鉴定 　【摘要】 制备均一性和特异性高的抗组氨酰-ｔＲＮＡ 合成酶抗体，为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法，为制备检测试剂盒提供原料。【方法】 采用常规融合和间接ＥＬＩＳＡ检测法，获取杂交瘤细胞株；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化；ＳＤＳ-ＰＡＧＡ电泳技术进行单克隆抗体的鉴定。【结果】 筛选获得了２株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为Ｗ００１和Ｗ００２；杂交瘤细胞克隆后，１００％的检测孔保持了分泌抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗体的能力；腹水纯化达到了较理想的效果；该２株单克隆抗体能特异性针对组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶，并能跟天然的蛋白结合。【结论】 所制备的均一性和特异性高的抗组氨酰-ｔＲＮＡ 合成酶抗体，可直接用于在ＥＬＩＳＡ、免疫印迹、免疫组化学等研究方面，达到了试验的目的。 【关键词】 组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶 抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶 单克隆抗体 鉴定 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ， ｗｈｉｃｈ ｅｎｊｏｙ ｈｉｇｈ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ，ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ． Ｂｅｓｉｄｅｓ， ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｌｉｑｕｉｄ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】 Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｒ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ； ｔｏ ｐｕｒｉｆｙ ｔｈｅ ａｓｃｉｔｅｓ ｗｉｔｈ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｕｓｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ ａｎｄ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０； ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ， ｎａｍｅｄ Ｗ００１ ａｎｄ Ｗ００２， ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ， ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｓｅｃｒｅｔｅ ａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｔａｂｌｙ． Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｂｅｉｎｇ ｃｌｏｎｅｄ， １００％ ｃｈｅｃｋｉｎｇ ｈｏｌｅｓ ｋｅｅｐ ｔｈｅ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ａｎｄ ｔｈｅ ａｓｃｉｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ ａｎｄ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０， ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ｓａｔｉｓｆｙｉｎｇ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｔｗｏ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅｉｒ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃｏｍｐｏｓｅ ｍｏｌｄ， ａｎｄ ｔｏ ｉｎｔｅｇｒａｔｅ ｗｉｔｈ ｎａｔｕｒａｌ ａｌｂｕｍｅｎ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】 Ｔｈｅ ａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｒｅ ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ａｎｄ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅ，ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ＥＬＩＳＡ，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｅｔｃ． Ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ， ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｈａｓ ｂｅｅｎ ａｃｈｉｅｖｅｄ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 　　抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗体是一类结缔组织病中的多肌炎（ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）和皮肌炎（ｄｅｒｍａｔ