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旱半夏组织培养条件优化探究 　 作者：王丽艳 ，荆瑞勇，谭焕波，唐敏，殷奎德 【摘要】 　　目的优化旱半夏的组织培养条件。方法以旱半夏小块茎为外植体进行组织培养。结果与结论使用卡拉胶代替琼脂固化，取得了良好的效果；旱半夏继代增殖最适培养基为：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，增殖系数达到6.5，平均苗高达2.5 cm；生根最适培养基为：1/2MS+NAA 0.1 mg/L，生根数4～5条，生根率达到100%。 【关键词】 旱半夏；组织培养；卡拉胶 　　Abstract：Objective To optimize tissue culture condition of pinellia tenata(Thumb)Breit.Methods With the tuber of Pinellia tenata(Thumb.)Breit as explant,the culture condition of tissue culture was optimized by tissue culture.Results and Conclusion The effect of κ-Carrageenan replacing of agar is good.The suitable subculture Proliferation medium is MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5 mg/L,the coefficient of proliferation get to 6.5,the average height is 2.5 cm,the suitable rooting medium is 1/2 MS+NAA0.1 mg/L,the rooting count is about 4～5,and the ratio of rooting gets to 100%. 　　Key words：Pinellia tenata(Thumb.)Breit; Tissue culture; κ-Carrageenan 半夏pinellia tenata(Thunb.)Breit为天南星科多年生草本植物，以块茎入药，是一种重要的中药材。其性温，味辛，有小毒，归脾、胃、肺，经炮制后具有润燥化痰、降逆止呕、消痞散结之功效［1］。 旱半夏多为野生，尽管具有明显的杂草性，但其繁殖系数较低，又缺乏有效的传播方式，因而是一种开拓性差的物种［2］。近年来随着连年采挖，野生资源日趋枯竭，远不能满足市场需求。人工栽培时，采用大块茎出售，珠芽、小块茎育苗，用种量大，成本高。小块茎无性繁殖易使半夏产量降低，品质退化，使半夏的栽培生产受到限制。利用组织培养建立半夏无性快速繁殖系统，可提高其繁殖系数，同时可防止品种退化问题。 　　本研究主要是对半夏组织培养条件进行优化，为大规模进行工厂化生产提供技术支持，前人研究中培养基使用琼脂固化，本研究尝试使用卡拉胶代替琼脂固化，取得了良好的效果，卡拉胶较琼脂价格低很多，因此可以为大规模进行工厂化生产节约成本。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料旱半夏小块茎， 购于安国市北方药材种子经销站。 　　1.2 消毒方法 　　取健康的旱半夏小块茎，用清水洗净，放于超净工作台中灭过菌的空三角瓶中，先用含有吐温的0.1%的升汞溶液消毒10～12 min，再用75%的酒精消毒30～60 s，最后再用无菌水冲洗5～6次，备用。 　　1.3 培养基及试验 　　设计设计以MS、1/2MS为基本培养基，基于我们的研究目的旨在指导并应用于大生产，所以为尽量节约成本和适应大规模生产所需，本试验选择了细胞分裂素中效果较好且最为廉价常用的6-BA、生长素选择了NAA，以期筛选出适合于半夏生产的最佳培养基。 发芽培养基：MS。 　　继代增殖培养基：在MS培养基中分别附加BA0.5，1.0，2.0，3.0 mg/L；NAA0.05，0.1，0.2，0.5 mg/L；采用二因素完全随机设计（见表1）进行最适激素配比的筛选，共计16个处理组合（见表2），每个处理接4株无菌苗，重复3次。表1 激素配比二因素完全随机设计因素水平（略） 生根培养基：在1/2MS培养基中分别附加0，0.01，0.05，0.10 mg/L NAA。 　　1.4 培养条件 　　所有培养基皆以浓度为0.7%的卡拉胶固化，含蔗糖均为3%，在高压灭菌前将pH值调至5.8，温度为（25±2）℃。光照1 500～2 000 lx，每日光照时数12～14 h。 　　　2 结果 　　2.1 无菌苗的获得 　　将小块茎接种到MS培养基中进行发芽培养，培养4～7 d内进行观察统计发芽情况。观察统计发现，当培养7 d时，小块茎的发芽率达到了100%，继续培养无