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木瓜中齐墩果酸提取、分离及鉴定 　　　摘 要:从木瓜中提取#65380;分离#65380;鉴定齐墩果酸#65377;方法:采取回流法#65380;索氏提取法和冷浸法从木瓜中提取齐墩果酸,然后采用酸碱沉降法#65380;氯仿萃取法分离纯化,并用高效液相色谱法进行鉴定#65377;结果:结果显示回流法提取效果最好#65377;结论:为齐墩果酸的工业化生产提供了一定的理论依据#65377; 　　关键词:木瓜;齐墩果酸;提取;分离;高效液相色谱法 　　 　　0 前言 　　 　　木瓜,又称皱皮木瓜,铁脚犁,酸木瓜等,为蔷薇科木瓜属植物贴梗海棠的果实#65377;木瓜是具有食用,药用观赏的多用途植物,果实成熟后,色泽金黄,气味芳香,果实营养极为丰富#65377;齐墩果酸(Oleanolic acid),分子式为C30H48O3,是木瓜的主要有效成分,别名土当归酸,大部分以游离酸或糖苷的形式存在,为五环三萜类化合物,是我国首次从植物中发掘出来的,是治疗急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎比较理想的药物#65377; 　　本实验以干木瓜为原料,在单因素实验的基础上设计正交实验,优化提取齐墩果酸的最佳工艺条件#65377;通过酸碱沉降或氯仿萃取的方法分离纯化,最后经高效液相色谱法对其进行鉴定#65377;该种方法准确可靠,为初步研究建始木瓜中齐墩果酸提供试验基础,为齐墩果酸的工业化生产提供了一定的理论依据#65377; 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 材料 　　1.1.1 试验原料 　　干木瓜片,粉碎机粉碎 　　1.1.2 试验的主要仪器和设备 　　HHS型电热恒温水浴锅,RE52-99型旋转蒸发器,722可见分光光度计,紫外分光光度计,电子天平,分析天平 ,液相设备,分析柱:Hypersil ODS25μm #65377; 　　1.1.3 试验主要试剂 　　95%工业酒精,分析醇的95%乙醇 #65380;甲醇#65380;冰醋酸#65380;高氯酸#65380;浓硫酸#65380;乙酸乙酯#65380;香草醛,齐墩果酸标准品#65377; 　　 　　1.2 方法 　　1.2.1 齐墩果酸提取方法的比较 　　(1)回流提取法:称取木瓜粉25g,分别用100ml,80ml,70ml的95%工业酒精在60℃下回流提取,时间依次为4,3,2小时,合并提取液,用乙醇定容至250ml,作为供试样#65377; 　　(2)索氏提取法:称取木瓜粉25g,用95%工业酒精在索氏提取器中提取,在90℃下至虹吸下溶液近无色(约8小时),将提取液转移至250ml容量瓶,定容至刻度作为供试样#65377; 　　(3)冷浸提取法:称取木瓜粉25g,用95%工业酒精150ml浸提一周,再用100ml乙醇浸提5天,合并浸提液,将提取液转移至250ml容量瓶,定容至刻度作为供试样#65377; 　　1.2.2 比色法测定齐墩果酸的含量 　　精密称取香草醛0.3g,用移液管加入6ml冰醋酸,配置成5%香草醛-冰醋酸溶液#65377;分别取回流法,索氏提取法和冷浸法提取的样品0.01ml(每种做3个平行)加入试管中,加热挥发溶剂,试剂空白为对照#65377;精密加入新制的香草醛-冰醋酸0.2ml和高氯酸0.8ml,在70℃恒温水浴加热15分钟#65377;流水冷却至室温,精密加入乙酸乙酯4ml,摇匀,在波长560nm处测定吸光值,比较三种方法提取率#65377; 　　1.2.3 回流提取的单因素实验 　　(1) 温度对提取率的影响:分别称取10g木瓜粉,以95%工业酒精,料液比为1:15,按40,50,60,70,80℃五个温度梯度提取9h,提取3次,合并提取液,定容至250ml#65377;分别取0.01ml提取液加入试管中,通过比色法测定齐墩果酸的含量(每个样品3个平行)#65377; 　　(2)时间对提取率的影响:分别称取10g木瓜粉,以95%工业酒精,料液比为1:15,按3h,5h,7h,9h,11h五个时间梯度,置于60℃水浴锅,提取3次,时间间隔分别为1.5,1,0.5h;2.5,1.5,1h;3,2.5,1.5h;4,3,2h;4.5,3.5,3h#65377;合并提取液,定容至250ml#65377;分别取0.01ml提取液加入试管中,通过比色法测定齐墩果酸的含量(每个样品3个平行)#65377; 　　(3)料液比对提取率的影响:按料液比为1:5,1:10,1:15,1:20,1:25,以95%工业酒精,置于60℃水浴锅中9h,提取3次,每次的溶剂用量为25,15,10ml;50,30,20ml;70,50,30ml;90,70,40ml;100,80,70ml#65377;