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木芙蓉叶提取物对大鼠慢性肝损伤实验性探究 　 作者：沈钦海，秦召敏，孙志军 【摘要】 　　目的观察木芙蓉叶提取物（CHE）对四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝纤维化的预防作用。方法实验大鼠随机被分为3组，即正常对照组、模型组、CHE预防组。CHE预防组除腹腔注射40%CCl4外，还给予CHE灌胃，1次/d，至第8周，所有大鼠均被处死。收集大鼠血液，检测转氨酶及肝纤维化指标；取不同部位肝组织除检测脂质过氧化外，还进行病理检测。结果与模型组相比，CHE预防组大鼠血清ALT，AST，HA，LN，PCⅢ，Ⅳ-C，MDA含量均降低，SOD，GSH-Px，ALB水平升高；病理学检测肝纤维化程度减轻。结论CHE对CCl4诱导的大鼠肝损伤具有保护作用，而且对其产生的肝纤维化有抑制和减轻作用。 【关键词】 木芙蓉叶提取物； 肝纤维化； 大鼠 木芙蓉属槿葵科木属植物，其花、叶和根均可入药，味微辛,无毒，具有清热解毒、消肿排毒、凉血止血之功效，在民间被广泛用于治疗痈肿疮疖。文献记载该药外用和口服有很好的抗炎、消肿作用，可以治疗阑尾炎、腮腺炎，也可以治疗关节炎、丹毒等。符诗聪等［1］研究发现木芙蓉叶有效成分具有明显的抗炎作用。罗仕华等［2］研究发现木芙蓉叶有效成分对肾缺血再灌注损伤有保护作用。近年来，研究发现木芙蓉叶中主要成分含有芸香苷（芦丁）等黄酮类化合物［3，4］。黄酮类化合物多有较强的抗自由基作用，对机体氧化损伤有很好的保护作用。本实验通过四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，探讨CHE预防肝纤维化的作用。 　　1 材料 　　1.1 药品和试剂木芙蓉叶（重庆市三峡库区）采用70%乙醇回流法进行提取, 其主要成分为总黄酮，提取过程参照姚莉韵等［5］实验方法，通过减压浓缩并真空干燥而获得浸膏（每克浸膏相当于生药47.8 g），然后用蒸馏水稀释备用。透明质酸(HA)、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）、四型胶原（Ⅳ-C）检测试剂盒（上海海军医学研究所）。过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及白蛋白（ALB）检测试剂盒(南京建成生物工程研究所产品)；转氨酶试剂盒(上海荣盛生物制剂厂)；四氯化碳（重庆西南化学试剂有限公司）。 　　1.2 动物Wistar实验用雄性大鼠，体质量180～200 g/只（重庆医科大学动物实验中心提供）。 　　2 方法 　　2.1 分组与给药将35只大鼠随机分为3组：正常对照组（10只），模型组（15只），木芙蓉叶提取物预防组（10只），各组间暴露因素无差异。模型组和干预组给予含40%CCl4的石蜡油溶液，腹腔注射8周，1 ml/kg，2次/周，干预组同时给予木芙蓉叶提取物（CHE），剂量为人体的10倍量灌胃（人木芙蓉叶临床拟用量为生药15 g/d，体重按60 kg计，即0.25 g/kg·d)，1次/d；正常对照组只给予生理盐水1 ml/kg，腹腔注射8周，其中模型组在8周中共有4只死亡。 　　2.1.1 血生化与脂质过氧化指标的检测动物麻醉，摘眼球取血，分离血清,用全自动生化检测仪检测ALT、AST和ALB值，采用放免法检测Ⅳ-C、HA、LN、PCⅢ型胶原，按试剂盒说明进行操作。取肝左叶同一部位，比色分析检测肝组织SOD、MDA和GSH-Px的活性。 　　2.1.2 肝组织病理学检测取肝右叶同一部位，10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，行HE染色，光镜下观察肝组织炎症及纤维组织增生状况。根据肝组织病理变化，将纤维化分为0～4级［6］：0级：无肝纤维化；1级：纤维结缔组织仅局限于汇管区或汇管区扩大,有向肝小叶发展的倾向；2级：纤维结缔组织增生进入肝小叶2/3并有1级同样的改变；3级：纤维结缔组织进入肝小叶中央周围；4级：纤维结缔组织在全小叶多处弥漫性增生，假小叶形成，并有3级同样的改变。 　　2.2 统计学分析实验结果经统计学处理，计量资料用 ±s表示，采用SAS6.12软件对两组间均数比较采用t检验，纤维化程度以等级资料表示，并用Ridit检验进行分析处理。 　　3 结果 　　3.1 CHE对肝功能的影响 由表1显示模型组与正常对照组比较差别有显著意义(Plt;0.01)，说明造模成功；预防组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)水平显著低于模型组（Plt;0.01），白蛋白（ALB）明显高于模型组(Plt;0.05)，结果表明CHE预防组有保护肝细胞的作用。表1 CHE对肝纤维化大鼠血清肝功能的影响(略) 　　　3.2 CHE对肝组织脂质过氧化指标活性的作用 由表2可见正常对照组与模型组比较，模型组过氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性降低, 丙二醛（MDA）含量升高，两组差异均有显著意义(Plt;0.01)；预防组与模型组比较，SOD与GS