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沙枣黄酮提取及其抗氧化作用探究 　 作者：李红，郅洁，马彦梅，李炳奇，刘红，龚晓武 【摘要】 目的对沙枣黄酮的抗氧化作用进行研究。方法以70%乙醇为溶剂，超声辅助法提取沙枣中的黄酮，用比色法测定其含量为0.928%；采用比色法测定沙枣黄酮对·OH、O-2·和DPPH· 等3种自由基的清除作用。结果沙枣黄酮对3种自由基都有明显的清除作用，清除能力为DPPH·gt;O-2·gt;·OH。结论清除率与浓度存在明显的量效关系，当浓度为0.4 mg·ml-1时，其清除率·OH为76.07%，O-2·为79.53%，DPPH·为93.91%。 【关键词】 沙枣； 黄酮； 抗氧化性 沙枣Elaeagnus angustifolia L.T属胡颓子科(Elaeagnaceae)胡颓子属(Elaeagllt L.)，耐盐碱、生长快、易繁殖，药用价值高，在新疆的塔克拉玛干沙漠及各河流沿岸(且末、若羌、民丰、英吉沙、阿克苏)和伊犁、托克逊等地广泛分布［1］。酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［2,3］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。但是关于沙枣黄酮抗氧化方面的研究尚未见报道。本研究将沙枣黄酮对 3种不同自由基的清除能力进行了一个较为全面、系统的研究，从而探讨沙枣黄酮的抗氧化作用，为进一步筛选天然植物抗氧化剂奠定了一定的基础。 　　1 材料 　　1.1 试剂乙醇(A.R)，氢氧化钠(A.R)，亚硝酸钠(A.R)，硝酸铝(A.R)，pH 8.2 Tris-HCl缓冲液(A.R)，0.02%双氧水(A.R)；7 mmol· L-1邻苯三酚(A.R)；pH 7.4磷酸盐缓冲溶液（PBS,A.R)；1.5 mmol· L-1邻二氮菲(A.R)；2×10-4mol·L-1的DPPH（二苯基苦基苯肼,Sigma公司生产）。 　　1.2 仪器TDL-5型低速台式离心机（上海隆拓仪器设备有限公司）；赛多利斯电子天平（德国Sartorius）；岛津UV-2401PC型紫外分光光度计（日本岛津公司生产）；R-200型旋转薄膜蒸发器（瑞士BUCHI ）；eppendorf手动可调程单道移液器（德国艾本德股份公司）；DL-360A型超声波清洗器（上海之信仪器有限公司）；SHZ-C型循环水真空泵（河南豫华仪器有限公司）；HH-S型恒温水浴锅（陕西太康生物科技有限公司）。 　　2 方法 　　2.1 黄酮的含量测定方法 　　2.1.1 对照品溶液的制备精密称取芦丁标准品适量，用甲醇溶解，定容于50 ml容量瓶中，制得浓度为0.2 mg· ml-1的对照品溶液。 　　2.1.2 最大吸收峰的确定精确吸取芦丁对照品溶液2 ml,加5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，摇匀后静置6 min，加10%硝酸铝溶液0.3 ml，摇匀后静置6 min，加10%氢氧化钠溶液4.0 ml，用蒸馏水定容至10 ml，摇匀，放置15 min，于400～600 nm波长处扫描，结果在510 nm处有最大吸收。 　　2.1.3 标准曲线的绘制精确吸取0.20 mg·ml-1芦丁对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3 ml摇匀，放置6 min，再加入10%硝酸铝溶液0.3 ml摇匀，放置6 min，最后加入10%氢氧化钠溶液4.0 ml，用蒸馏水定容至10 ml，摇匀，放置15 min，在510 nm处测定其吸光度值。以吸收度为纵坐标，对照品溶液的浓度（mg·ml-1）为横坐标，得线性回归方程：Y=9.735X -0.011 5，r=0.999 9。 　　2.1.4 黄酮的提取准确称取粉末30.00 g，按料液比1∶10加入70%乙醇浸泡30 min，超声提取1 h， 过滤后得滤液和滤渣。滤渣再按上述方法提取2次，浓缩，定溶至50 ml容量瓶，作为试样液。 　　2.1.5 黄酮的含量测定取试样液2 ml于10 ml容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min；再加入10%硝酸铝溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min；最后加入10%氢氧化钠溶液4.0 ml，用蒸馏水定容至10 ml，摇匀，放置15 min；在510 nm处测定其吸光度值。根据标准曲线计算得沙枣果肉黄酮含量为0.928%。 　　2.2 自由基的生成及清除率的测定 　　2.2.1 羟自由基的生成及清除率的测定［4］精密量取2.0 ml PBS磷酸盐缓冲溶液 (pH=7.4，下同)和4.0 ml蒸馏水于试管中，混匀作空白参比管；精密量取2.0 ml PBS，1.0 ml邻二氮菲(1.5 mmol· L-1