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清毒汤治疗急性肝损伤大鼠肠源性内毒素血症实验探究 　 作者：高连印 付修文 谭 勇 杜宇琼 车念聪 【摘要】 目的探讨清毒汤对大鼠肝损伤内毒素血症的作用机制。方法建立硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠肝损伤内毒素血症模型，以清毒汤进行干预，通过血液生化及病理检查，观察其对内毒素血症大鼠肝功能、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内毒素（ET）的影响。结果清毒汤能明显降低TNF-α，ET的含量，减轻肝细胞坏死程度，与模型组比较差异有显著性意义(Plt;0.05或Plt;0.01)。结论清毒汤能使ET含量、TNF-α水平降低是其对TAA所致大鼠肝损伤具有防护作用的机制之一。 【关键词】 清毒汤 药效学 内毒素血症 大鼠 　　清毒汤是由《伤寒论》中的小承气汤化裁而来。该方具有清热燥湿解毒、活血凉血育阴的功效。经临床验证清毒汤治疗慢性肝病肠源性内毒素症安全有效，用后可以迅速改善症状，抑制内毒素（ET）的产生，提高机体清除ET的能力，是重症肝病治疗过程中重要的辅助治疗药物［1］。为了进一步研究清毒汤的作用机制，我们采用硫代乙酰胺所致肝损伤模型进行了如下实验。 1 材料与仪器 1.1 动物 选用SD大鼠38只，体重200～220 g，雌雄兼用，清洁级。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）-2006-0003。 1.2 药物 清毒汤，常规水煎制，生药含量为1.1 g/ml。 1.3 试剂 硫代乙酰胺，由北京化学试剂公司提供，批号010629；戊巴比妥钠，北京通县育才精细化工厂生产，批号950427；鲎试剂盒，由上海伊化临床医学科技公司（上海市医学化验所）提供；丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶（AST）试剂盒，由Roche公司提供； 肿瘤坏死因子-α（TNF-α）放免试剂盒，由北京北方生物技术研究所提供。 1.4 仪器 Reicheit-Jung 2040切片机德国产；BH-2光学显微镜，Olympus，日本；Qwin图像分析系统，Leica德国产；752C紫外可见分光光度计，上海第三分析仪器厂产品；GC-911 γ放射免疫计数器，中国科学技术大学科技实业总公司产品；日立7170全自动生化分析仪，日本产。 2 方法 2.1 分组及处理 将28只大鼠随机分为3组：正常对照组10只，模型组9只，清毒汤组9只。 清毒汤组按照1 ml/100 g 体重给予灌胃，1 h后腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）600 mg/kg体重，分别于6，12h后再次灌胃给予清毒汤；模型组灌胃给予同容积的蒸馏水，1 h后腹腔注射TAA，剂量同清毒汤组，分别于6，12 h后再次灌胃给予相应等量的蒸馏水；正常对照组灌胃相应等量的蒸馏水和腹腔注射相应等量的生理盐水。注射24 h后，将各组大鼠以45 mg/kg体重的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，于腹主动脉无菌取血，分离血清、血浆，分别用于ALT，AST，TNF-α以及内毒素含量的测定。取肝脏，用10%福尔马林固定。 2.2 指标测定 2.2.1 肝脏损伤情况的病理形态学观察取肝脏，常规取材，石蜡包埋，HE染色。光镜下对其进行病理形态学观察，并用Qwin图像分析系统测定其损伤面积百分比。测定方法：在200×光镜下，随机选取10个视野，测定其损伤面积百分比，取其平均值。 2.2.2 血清中ALT，AST活性浓度测定用日立7170全自动生化分析仪进行测定。 2.2.3 血清中TNF-α含量测定按照试剂盒所附说明书，用GC-911 γ放射免疫计数器进行测定。 2.2.4 血浆中内毒素含量测定按照试剂盒所附说明书，用752C紫外可见分光光度计进行测定。 2.3 统计学处理结果以±s表示，采用方差分析进行检验。 　 3 结果 3.1 病理形态学观察结果 3.1.1 正常对照组肝脏结构正常，被膜不增厚，小叶境界清晰，肝板以小叶中央静脉为中心，呈放射状排列。肝板为一个细胞厚度。肝窦未见扩张，亦无狭窄。肝叶实质细胞未见变性及坏死。中央静脉壁无增厚，门管区三管清晰可见，无淋巴细胞浸润，未见结缔组织增生。间质细胞不增多。见图1。 3.1.2 模型组肝脏结构基本正常，被膜不增厚，肝小叶境界尚清晰，肝板未见增厚。肝实质可见多发灶状水泡变性及气球样变，并可见新鲜的点状、灶状、带状及桥联状坏死。坏死灶可见细胞碎片，并见中性粒细胞、少量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润。浸润之炎性细胞可见退变及核碎裂。坏死灶内有处可见圆形嗜酸性小体。 点、灶状坏死多见于中央静脉旁小叶下静脉周围，严重处小叶中心带呈带状坏死，坏死灶有时可与邻近的中央带或周边带相连，构成桥连状坏死。见图2。 3.1.3 清毒汤组所见与模型组相似，但点灶状坏死、中央带状坏死及桥连状坏死均较模型组为轻。见图3。 图3 清毒汤组 进一步的图像分析