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溶血对乙型肝炎表面抗原检测影响 　摘　要：溶血对乙型肝炎表面抗原测定的影响。方法：采用ELISA酶免疫对健康人和乙肝患者进行检测比较。结果：溶血标本采用ELISA双位点夹心一步法易产生假阳性。结论：溶血影响乙型肝炎表面抗原的测定结果， 溶血标本应采用二步法进行HBsAg检测。 关键词：溶血；乙型肝炎表面抗原；ELISA 　　乙型肝炎表面抗原的检测是诊断乙肝的主要指标，随着检验技术的不断发展酶联免疫法因其简便，灵敏度高，特异性强，不需要特殊设备的特点，而被广泛应用[1-2]。由于各种原因造成的溶血，非特异性物质对试验造成影响，致使检验结果出现假阳性，现报告如下。 　1 资料与方法 　1.1 一般资料：14例乙肝患者检查，86例健康人体检。 　1.2 试剂：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法，ELISA），上海科华生物技术有限公司生产。 　1.3 方法 　1.3.1 溶血血清制备，将待测血清放置于低温冰箱（-40℃）内冻20 min后，取出融化，以3 000 r/min离心10 min，分离溶血血清。溶血和不溶血各1份。 　从冰箱取出试剂盒室温放置30 min，微孔反应条中每孔加入待测标本50μL，设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照) 各1滴,并设空白对照 1孔。然后每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置37℃避光孵育30 min，弃孔内液体，洗板5次后拍干。每孔加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，置37℃避光孵育15 min，目测比色，肉眼判断结果：显蓝色为阳㈩，无色为阴性㈠。 　1.3.2 最后结果应用统计软件SPSS 13.0进行分析。 　2 结果 　2.1 14例溶血和不溶血乙型肝炎阳性结果完全一致。 　2 .2 68例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原阴性结果完全一致。 　2.3 18例溶血雨不溶血乙型肝炎表面抗原结果不一致，出现假阳性。经二步法：从冰箱取出试剂盒室温放置30 min。微孔的反映条件中各加入50 μL待测液，并分阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照或阳性对照，各1滴，并设空白对照1孔，37℃避光孵育30 min，弃空内液体、洗版5次拍干，每孔加酶结合物1滴（空白组除外），充分混匀，封板，然后在 37℃避光孵育30 min，弃空内液体，洗版5次，拍干，加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，然后在37℃避光孵育15 min，目测比色并判断结果：HbsAg显蓝色为阳性，无色为阴性，结果均为阴性。结果经SPSS 13.0分析，见表1。 　表1 血液标本ELISA检测结果分析检测结果 乙肝患者（例） 健康人（人） 溶血 不溶血 溶血 不溶血 阳性（﹢） 14 14 18 0 阴性（﹣） 毕业论文 0 0 论文代写 68 论文代写 86 论文代写 F值 - 毕业论文 - 1284.44 毕业论文 P值 - - 0．000 　2.4 溶血对阴性标本检测易出现假阳性，阳性标本无影响。 　3 讨论 　3.1 引起溶血的常见原因及对策 　3.1.1 采血时发生的溶血：⑴注射器和容器不干燥，不清洁；⑵注射器与针头连接不好；⑶压脉带捆扎时间过长，淤血过久[3]；⑷抽血消毒时酒精未干就进行抽血；⑸穿刺不顺利损伤组织过多；⑹抽血速度过快针尖在静脉中探来探去；⑺血液注入容器中时未取下针头，或用力推出产生大量气泡；⑻在有血肿的地方采集血样；⑼渗透压的改变；⑽为了尽快分离血清，用竹签搅拌不当引起的溶血等；⑾用干燥管采血等。 　3.1.2 患者自身的因素：①患者自身有溶血性疾病；②由于患者严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血。 　3.2 溶血标本采用酶联免疫法（ELISA）检测：乙型肝炎表面抗原易出现假阳性分析原因，可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），能与聚乙烯孔内预包被的抗原或抗体结合，在洗涤过程难以完全洗脱；也可能是谷胱甘肽等过氧化物酶的作用，谷胱甘肽广泛存在于人体组织和细胞中，当溶血时，细胞内的过氧化物酶进入血浆，并大量吸附于细胞碎片及纤维蛋白原上，从而增加加样后微孔板洗涤的难度，同辣根过氧化物酶作用相似，其可使过氧化氢释放出原生态氧，从而催化底物甲联苯胺生成可溶性物质显色，使乙型肝炎表面抗原易出现假阳性[4]。由于一步法洗涤步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显蓝色，使乙肝标志物HBsAg产生假阳性。二步法首先将血清洗掉，残留的过氧化物酶含量极微。温育过程中不会与酶结合物所含抗原与抗体结合，再经第二次洗涤，大大降低了残留的可能性，保证了结果的准确无误。 　3.3 对待结果要严谨：检验