细胞悬液法及组织块埋植法制作兔VX2肝癌影像模型对照探究.docVIP

细胞悬液法及组织块埋植法制作兔VX2肝癌影像模型对照探究 　 作者：郭兴 丁伟 李雪鹏 宋惠坤 【摘要】 　　目的：通过对照细胞悬液法与组织块埋植法，选择较合理的兔VX2肝癌模型的造模方法。方法：取传代荷瘤VX2种兔，分离肿瘤，制备肿瘤细胞悬液和肿瘤组织块，取新西兰大白兔各10只，分别经超声导引肝内注射和开腹肝内组织块埋植，3周后处死模型兔，观察原位肿瘤大小，肝内、腹腔及肺部转移情况。结果：两种方法造模，成模率均为100％；组织块埋植法组原位肿瘤体积明显大于细胞悬液组；组织块埋植造模较少引起异位种植，肿瘤生长较为均一。结论：组织块埋植法优于细胞悬液法。 【关键词】 VX2 肝癌 动物模型 　　Abstract Objective:To choose a better method to make a rabbit VX2 liver cancer model through cell suspension injecting and tissue lump embedding. Methods： After separating the tumors in cancer bearing VX2 rabbit, cells suspension and tissue lump were prepared. Then the cells suspension was injected into ten New -Zealand albino rabbits livers through hypersound .And tissue lumps were embedded into another ten New -Zealand albino rabbits livers .After 3 weeks, model rabbits were executed ,the size of tumors ,intra-liver, enterocoelia, bellows transfer were recorded. Results： The achievement ratio of VX2 model was 100% for these two methods. The size of tumor in tissue lump embedding group was significantly larger than cell suspension injecting group. Ectopia plant was much less in tissue lump embedding group, and the tumors were uniform. Conclusion： The method of tissue lump embedding was better than cell suspension injecting. 　　Key words VX2；Liver cancer；Rabbit model 　　VX2肿瘤细胞株是由shope病毒诱发兔乳头状瘤衍生的鳞状细胞癌，经过移植传72代后正式建株、命名［１，２］。由于兔缺乏对VX2细胞的免疫，可直接移植至肝、肾、肌肉等器官建立原位模型［３］，是目前较常使用的医学影像模型。文献报道VX2肝癌模型的制作方法主要包括细胞悬液法和组织块埋植法，本研究通过两种造模方法对照，以探讨较为简便实用，成模率高的模型制作方法。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　新西兰大白兔40只，2 kg～2.2 kg，雌雄各半，四川大学实验动物中心提供, 合格证号：10）荷瘤VX2种兔 (由华中科技大学介入科冯敢生教授惠赠)，超声诊断仪（惠普HDI 5000，美国），CO2孵箱(SANYO, MCO-17A2,日本)，倒置显微镜（OLYMPUS, 日本），血细胞计数板，DMEM培养液（自制），PBS缓冲液（自制），显微手术器械。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞悬液及肿瘤组织块制备：取传代中大腿荷瘤种兔一只，提前一天大腿内侧备皮，腹腔内注射10％水合氯醛2.5 mL/kg，安定2.5 mg/kg，麻醉后，碘伏大腿内侧及腹股沟区消毒，剪开局部皮肤，分离皮下组织，细心分离肿瘤，将肿瘤完整取出。剪开肿瘤，置于37 ℃PBS缓冲液的培养皿中，用解剖镊细心分离肿瘤组织，将血管及坏死组织分离清除干净，置于盛DMEM培养液的培养皿中，取鱼肉样肿瘤组织分别制备细胞悬液和组织块：用眼科剪剪碎成约1 mm３大小， 2 mL匀浆器匀浆，制备细胞悬液，血细胞计数板计数，DMEM培养液调整细胞浓度，达到gt;107 cell/mL；将肿瘤组织剪成约4 mm×4 mm×4 mm大小组织块，置DME