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维生素A酸对小鼠囊胚细胞凋亡影响 　 作者：熊彦娥 张端莲 吴秀卿 【摘要】 　　目的：探讨全反式维生素A酸（ATRA）对体外培养小鼠囊胚中内细胞群（ICM）和滋养层(TE)细胞凋亡的影响。方法：获取妊娠3.5d小鼠囊胚，分别培养在含0μmol/l、1μmol/l 和10μmol/l的ATRA的M199培养基中24h，用带有荧光（FITC）标记的原位末端标记（TUNEL）检测法，观察ATRA对小鼠囊胚细胞凋亡的效应。结果： ATRA可诱导囊胚细胞凋亡，并增强小鼠囊胚Fas蛋白表达。结论：维生素A酸对小鼠胚胎的发育具有细胞毒性作用。 【关键词】 细胞凋亡　全反式维生素A酸　囊胚　小鼠 　　Retinoic Acid Affects Apoptosis in Mouse Blastocys 　　Abstract Objective： To observe apoptosis in ICM and TE induced by alltrans retinoic acid (ATRA)in mouse blastocysts in vitro. Methods： Mouse 3.5 d blastocysts were exposed for 24h to doses of 0μmol/l, 1μmol/l and 10μmol/l alltrans retinoic acid , Fixed blastocysts observed for their apoptosis by means of the terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP nickend labeling(TUNEL). Results： ATRA can induce apoptosis in TE and ICM cells of mouse blastocysts. Conclusion： This study examined the cytotoxic effect of ATRA on mouse embryos. Key words apoptosis； alltrans retinoic acid； blastocyst； mouse 　　维生素A酸（retinoic acid， RA）是维生素A在体内的氧化代谢产物之一。按几何异构体的不同，其可分为全反式维生素A酸（all trans retinoic acid， atRA）、9顺式维生素A酸（9cis retinoic acid，9cRA）和3，4双脱氢维生素A酸(3，4didehydroretinoic acid，dd RA)。维生素A酸是公认的致畸因子，几乎所有常见的维生素A酸均可诱发实验动物的先天畸形，并且不同结构的维生素A酸的致畸作用强度有很大的区别，其中以全反式维生素A酸的致畸作用最强［1］。国外有资料显示体外培养的小鼠囊胚用过量的RA处理后，会导致胚胎生长发育迟缓而着床失败或着床后胚胎死亡。RA对囊胚的这种致畸效应可能由于其诱导ICM和ＴＥ细胞过渡凋亡所致，而RA诱导囊胚细胞凋亡国内目前尚未见报道。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 试验动物 　　一级健康昆明种小白鼠（SPF级），由武汉大学医学院动物试验中心提供。 　　1.1.2 主要试剂和仪器 　　孕马血清（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）为天津生物制品厂产品；ATRA购自上海第六制药厂； M199培养基为美国Hyclone公司的产品；TUNEL试剂盒购自宝灵曼公司；激光共聚焦扫描显微镜型号为Leica DMIRE2。 　　1.2 方法 　　1.2.1 小鼠囊胚的获取 　　选用一级健康昆明种小白鼠,雌雄各30只,鼠龄8～10周，体重30±5g。雌鼠腹腔注射10U PMSG，48h后再腹腔注射10UhCG促超排卵,当晚与雄鼠1:1合笼。次日晨检查阴栓，见阴栓者记妊娠0天。于妊娠3.5d时，将孕鼠脱臼处死，由阴道端插入7号针头注入M199培养基，冲出早胚。将所有的早胚冲入凹皿中，并用PBS洗涤囊胚。选取扩张期囊胚，并随机地用作不同实验。 　　1.2.2 胚胎培养 　　将所有囊胚随机分为3组，即对照组和两个实验组，培养在35mm Falcon塑料培养皿中，每皿加入1ml培养基。实验1组中加入1μmol/l ATRA，实验2组中加入10μmol/l的ATRA，所有ATRA均溶于0.02%的DMSO。对照组只加等量的0.02% DMSO。并置入37℃、5% CO2 培养箱内培养24h后，吸出囊胚，并用PBS洗涤，随后立即固定于4%多聚甲醛，再用PBS洗涤3次，最后转到涂有多聚赖氨酸的玻片上，干燥24h待用。 　　1.2.3 TUN