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肿瘤停滞因子功能及结构 　 作者：石小莉，朱丽丽，张立梅，袁彩，陈锦灿，黄明 【关键词】 肿瘤停滞因子；基质金属蛋白酶MMP9；αvβ3整合蛋白 基金项目：中国科学院”百人计划”基金；福建物质结构研究所结构化学国家重点实验室资助项目(IB021061) 美国哈佛医学院的Folkman医师1972年首先提出肿瘤的生长和转移与血管的新生有关［1,2］，这观点随后得到了大量的基础研究和临床实验的证明［3］。迄今为止，在体内已发现了多种血管生成的促进和抑制因子，如vascular endothelial growth factor(VEGF)、angiostatin、endostatin、thrombospondin1、canstatin和tumstatin等［47］。其中，很多血管生成抑制因子能通过作用于增殖和转移的内皮细胞来抑制肿瘤生长。Tumstatin（肿瘤停滞因子）就是其中一种,而且与其他的血管生成抑制因子不同的是它能选择性地作用于肿瘤血管的内皮细胞，而不影响到正常的内皮细胞。本文报道了肿瘤停滞因子的功能及其结构研究的结果。 1肿瘤停滞因子与血管基底膜之间的关系 在血管新生的过程中，内皮细胞必须依附于血管基底膜（vascular basement membrane）才能形成血管。血管基底膜是特化的细胞外基质，它不仅对内皮细胞提供了机械的支持，而且也影响细胞的生物学行为，如分化、增殖和迁移等［8］。对基膜的组成进行研究发现，IV型胶原蛋白是组成血管基底膜的主要大分子物质，IV型胶原蛋白有6种不同的基因产物（即α1～α6），三条α链聚合而成一个三螺旋体。α1、α2链存在于人体内所有组织的基底膜中，而其他4种α链则分布于不同的组织基底膜。每条α链可分为三个不同的结构域：N末端的富含半胱氨酸7S结构域、中间三螺旋体结构域和C末端的球形非胶原结构域1(NC1)［9］。 IV型胶原蛋白通过其NC1结构域聚合成三聚体形成网络结构构成基膜的支架。其中α3链的NC1区即为肿瘤停滞因子［6］。 2肿瘤停滞因子在体内、体外的生物活性 肿瘤停滞因子全长232个氨基酸，在多种体内和体外实验中研究发现其具有两个功能相互独立的活性区域，即N端54～132氨基酸多肽片断和C端185～203氨基酸多肽片断。前者具有抗血管生成活性，后者则具有抗肿瘤增生和入侵活性。这就凸显了肿瘤停滞因子在众多抗肿瘤药物中的特殊地位，使得其成为有潜力的药物蛋白，也因此引起了人们的广泛关注。 90年代初科学家用体外合成的肿瘤停滞因子C端185～203氨基酸片断作用于多形核白细胞，结果表明此活性片断具有体外抗肿瘤活性［１０］。为了了解肿瘤停滞因子在体内的作用，Kalluri及他的同事［１１］分别将三种不同类型的肿瘤植入野生型或肿瘤停滞因子缺陷型小鼠中。实验结果表明：当肿瘤体积小于500mm3时，缺陷型小鼠和野生型小鼠中的肿瘤以相同的速率生长；当体内的肿瘤体积大于500mm3后，缺陷型小鼠中的肿瘤生长速度大大加快，数天后肿瘤体积也比野生型的大了两倍多。这种影响是可逆的。肿瘤停滞因子在正常小鼠体内循环系统中的生理浓度大约是336±28 ng/ml。如果每天向体内肿瘤细胞体积已经达到500mm3的缺陷型小鼠注射300ng重组肿瘤停滞因子就会把肿瘤生长速率降低到野生型的水平。这些结果说明了肿瘤停滞因子是强有力的肿瘤抑制分子 ［７１２］。进一步研究发现肿瘤停滞因子C端185～191(CNYYSNS)七肽序列中的188～191四个氨基酸(YSNS)在空间形成β转角，是抗肿瘤生物活性的核心部分，也是与αvβ3整合蛋白相互作用的关键位置［１３］ 。 3肿瘤停滞因子功能的调控机制 为了研究肿瘤停滞因子抗血管生成活性，Maeshima等在体外分别克隆了8个具有相互重叠氨基酸序列的多肽片断并结合基因敲除的方法对它们进行研究，发现54～132氨基酸片断是它的生物活性核心部位。随后这个研究小组继续对54～132氨基酸片断研究发现74～98这25个氨基酸具有与全长的肿瘤停滞因子相等的抗血管生成活性。这一结果也在小鼠的前列腺癌PC3模型和肾透明细胞癌786O模型中得到了验证。作为一种有效的抗血管新生的内源性因子，肿瘤停滞因子的生物活性主要取决于两个因素：基质金属蛋白酶MMP9和αvβ3整合蛋白。前者主要负责降解血管基底膜以生成肿瘤停滞因子，后者则是肿瘤停滞因子的受体蛋白。 MMP9是怎样降解基膜胶原蛋白产生肿瘤停滞因子的？在肿瘤入侵机体的过程中，肿瘤细胞和基膜之间的相互作用启动了一系列的基底膜组分的蛋白水解反应。这个降解过程是由包括基质金属蛋白酶（MMPs）和血浆酶原等蛋白酶所介导的。MMPs是一个包含至少25个成员的大家族。MMP9主要由免疫细胞、基质细胞和肿瘤细胞产生，