胞内Ca-%272%2b-释放在IP-%2c3-激动剂UTP调控猪冠脉平滑肌细胞STOCs中的作用.pdf

胞内Ca2+释放在口3激动剂UTP调控猪冠脉平滑肌细胞STOCS 中作用的研究‘ 摘 要 目的：大电导钙激活钾通道①Kc。通道)是血管平滑肌舒缩调控机制中 的重要靶点≮平滑肌细胞肌浆网上三磷酸肌醇受体(inositol receptors，RyRs) receptors，IP3Rs)和兰诺定受体(ryanodine 1,4，5．trisphosphate 介导的ca2+释放可引起细胞内局部[Cap]显著增加，激活邻近胞膜上BKc。 transientoutward 通道的开放产生自发性瞬时外向电流(spontaneous 反馈调节平滑肌的收缩。目前多数研究已经证实在血管平滑肌，RyRs介导 的Ca2+释放与BKc．通道之间的耦联对于血管舒缩活性的调控具有重要意 义，而三磷酸肌醇(inositol 二信使，其调控血管平滑肌Bl屯通道的机制还存在较多争论。前期研究己 证实了IP3对猪冠状动脉平滑肌细胞BI毛。的单通道活性具有激活作用，但 其对于全细胞构型时BKc。通道的调控机制目前尚不清楚。由于IP3极易降 解不稳定，且目前国内外缺乏可透膜的IP3衍生物，本实验拟采用IP3的前 体物质尿嘧啶三磷酸(uridine 对于急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞STOCs的作用，探讨IP3对全细 胞构型时BKc。通道的作用机制，为下一步结合激光扫描共聚焦显微成像技 术研究细胞内Ca2+信号的动力学与STOCs之间的相关性奠定基础。方法： ’国家自然科学基金资助项目(No 分离新鲜猪心的冠状动脉血管的二级分支，纵向剖开血管并剔除内外膜， 将其斜行剪成2mmx5IIun的组织条块，置于酶液中进行两步法消化。选取 贴壁良好，折光性强，具有较强立体感，表面光滑的平滑肌细胞进行实验。 采用全细胞穿孔膜片钳技术记录STOCs的变化。电流信号经膜片钳放大器 9．0软件采集电 (Axopatch200B)放大，滤波处理后输入计算机，经pClamp 流变化，Mini 6．0软件系统进行数据分析。实验方案如下：①观察 Analysis C(phosphonpaseC，PLC)在U11P调控STOCs的信号传导途径中的作用。 ④进一步分析细胞外Ca2+内流和细胞内肌浆网钙库Ca2+释放在UrP对 STOCs调控中的作用。结果：1．急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞 STOCs的基本特性：(i)STOCs的幅度和频率具有明显的电压依赖性，随机 性地叠加在全细胞B＆。通道电流上。②B＆。通道的特异性阻断剂 的活性可被完全抑制(n=5)，而用L型电压依赖性钙通道阻断剂维拉帕米 1．急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞的STOCs是由BKc。通道介导的， 其幅度和频率具有明显的电压依赖性，随机性和高度变异性。2．STOCs的 产生依赖于细胞外Ca2+，但L型电压依赖性钙通道介导的Ca2+内流在其中 挥重要作用。 关键词：大电导钙激活钾通道；自发性瞬时外向电流；三磷酸肌醇； UrP；穿孔膜片钳技术；猪冠状动脉平滑肌细胞；调控 in of TheeffectofintracellularCa2+release regulation in UTPonSTOCs coronaryarterymyocytes舟 agonist porcine Ca”-activated potassium Abstract：Objective：Large—conduc