RNA干扰抑制多型性胶质母细胞瘤FGF-2和B7-H1表达的的分析研究.pdf

RNA干扰抑制多型性胶质母细胞瘤FGF-2和B7-HI表达的研究 中文摘要 中文摘要 目 的： fibroblast 1、体外研究大鼠c6胶质瘤细胞系碱性成纤维细胞生长因子(Basic growth death 亡配体一1(programmedreceptorligand1，PD-L1／B7一HI)的表达，并对照血管内 的诱导作用。 2、研究不同序列siRNA在体外对于目的基因表达的影响，探讨不同序列和不 体外对目的基因表达的抑制作用，并探讨siRNA转染浓度、转染时间和目的基因 表达之间的相关性。 3、研究siRNA体外对胶质瘤细胞增殖的影响，探讨比较乱序siRNA和不同 细胞凋亡和周期的影响，探讨比较不同转染浓度，不同时间点细胞凋亡和周期的 变化。 对肿瘤生长的抑制作用。 方法： 1、体外c6细胞系氯化钻(CoCh)100uM低氧培养，IFN．Y500u／ml诱导U251 FGF．2和VEGF以及U251细胞B7．HlmRNA的表达。 测FGF-2 后流式细胞仪检测B7．H1的表达，筛选有效siRNAo B7．HI蛋白的表达。 RNA干扰抑制多型性胶质母细胞瘤FGF-2和B7-HI表达的研究 中文摘要 WST-8比色法测定吸光度，绘制生长曲线。 检测细胞周期和凋亡的变化。 6、将c6细胞接种于裸鼠皮下，成瘤后处死裸鼠分离培养成瘤细胞，将成瘤 siRNA，每天测量肿瘤 细胞接种于裸鼠皮下，成瘤后按不同剂量瘤内注射FGF-2 体积，10天后处死裸鼠，肿瘤称重。 结果： PO．001。 63．930生2．420％，sim峨毋和．C分别与siRNA．A两两比较，Pn001。 50％，Pn001。 II RNA干扰抑制多型性胶质母细胞瘤FGF-2和BT-HI表达的研究 中文摘要 6、RNA干扰对胶质瘤细胞增殖的影响：转染200-600nMFGF．2siI斟A，与空 白对照组和阴性对照组相比较，吸光度(A)值差异性显著PO．001。C6细胞增殖抑 统计学意义，P=0．1250．05。 7、抑制FGF．2的表达使C6细胞阻滞在s期，促进细胞凋亡：转染24h时间 S期细胞分布在44．51％，转染300nM，72h后， 点s期细胞分布在37-39％，48h 百分比为26．508士2．770％，P0_001。 8、siRNA肿瘤内注射明显抑制肿瘤的生长：空白对照组与阴性对照组肿瘤的 生长差异性无统计学意义，P=I．0000．05，各实验组与空白对照组比较，肿瘤的 生长，统计学差异性显著，PO．01，空白与阴性对照组肿瘤重量分别为 实验组肿瘤重量与空白对照组比较PO．001。siRNA对肿瘤生长的抑制呈剂量依赖 关系：siRNA注射剂量与肿瘤重量成负相关，相关系数为r一0．933，回归分析决定 系数彤=0．871，PO．001。 蛋白表达之间的相关系数r=．0．975，PO．001，B7．H1mRNA与蛋白表达相关系数 ，=0．928，R2=0．862，PO．001。 结论： 1、低氧培养对于C6细胞FGF．2的表达无影响，而能明显诱导VEGF的表达， FGF．2和VEGF可能通过不同的途径促经胶质瘤细胞的增殖和肿瘤血管形成。IFN 结合于B7．HI启动子通过JA刚STAT途径诱导表达。 2、不同序列siRNA对目的基因的抑制效率不同，与序列本身和目的基因 制目的基因的表达，阴性对照siRNA对目的基因的表达无抑制作用，RNA干扰具 Ill RNA十扰抑制多型性胶质母细胞瘸FGF．2和B7．Hl表达的研究 中文摘要 有很高的特异性，其抑制效果明显优于传统技术，在细胞内抑制持续时间3天， 的抑制与