以丝胶蛋白为载体的固定化L-天冬酰胺酶分析研究.pdfVIP

7 曾56533 以丝胶蛋白为载体的固定化L一天冬酰胺酶研究 中文提要 中文提要 L．天冬酰胺酶作为治疗淋巴性白血病、恶性淋巴肿瘤的酶制剂在国内外已广泛应 用于临床。由于L．天冬酰胺酶是外源蛋白，在临床应用中存在两个问题：一是酶制剂 在体内易被降解，半衰期短；二是免疫原性，直接使用会引起严重的副作用，限制了 该酶的使用。为了克服游离酶制剂的缺点，L．天冬酰胺酶常被其它材料或载体修饰或 固定制成修饰酶或固定化酶。 本文应用蚕茧壳或废丝为原料，用高压高温脱胶法制备丝胶溶液，经过过滤、纯 化、浓缩以及喷雾干燥，制成分子量200KDa以下的丝胶蛋白粉术，这种蛋白难溶于 冷水而能溶于热水，粒度在1-30p_m之间，平均粒径12btm左右。将这种热水溶性丝 胶粉末继续用01-3N HCI溶液降解处理，这种降解液再经中和、过滤、纯化和喷雾 干燥，制成分子量60KDa以下的水溶性丝胶蛋白粉术，易溶于冷水。 以热水溶性丝胶蛋白粉术和水溶性丝胶蛋白为载体，用戊二醛作为交联剂，分别 制成颗粒状的和水溶性的两种固定化L．天冬酰胺酶。通过对这两种固定化酶的活性 和动力学性能如pH、温度、热稳定性等详细分析，结果表明：酶经固定化后，具有 较好的操作稳定性：与游离酶相比其蛀适pH值偏向酸性一侧；对胰蛋白酶的水解稳 定性及存贮稳定性均较游离酶有很大程度地提高，体外半衰期也有较明显地延长；热 水溶性丝胶蛋白的固定化酶米氏常数Km值为1．2x10一mol／L，水溶性丝胶蛋白的固 Oxl0。2 定化酶Km值为167x10～mol／L，前者较游离酶(Km值1 mol／L)低12倍， 后者低60倍左右，这充分说明L一天冬酰胺酶经这两种载体固定后与底物的亲和力得 到了很大的提高。这些研究结果表明，无论是热水溶性的丝胶粉末，还是水溶性的丝 胶蛋白均是L一天冬酰胺酶固定化的良好载体。 关键词：丝胶蛋白，L．天冬酰胺酶，固定化酶 作者：陶美林 指导教师：张雨青 以丝胶蛋白为载体的固定化L～天冬酰胺酶研究 英文提要 StudiesOilTheSilkSericinProtein Asa of Support Immobilized L-asparaginase Abstract obtainedfromE．colihasbeen usedinthetreatment L—asparaginase extensively of acute its lymphoblasticleukemia．Notwithstandinghightherapeuticefficacy,the use leadtOsevel℃sideeffectssuchas therapeutic may fever,skinrashes， ofasparaginase