运动配合中药及艾灸对慢性疲劳综合症大鼠行为及外周血淋巴细胞凋.docVIP

运动配合中药及艾灸对慢性疲劳综合症大鼠行为及外周血淋巴细胞凋 　 作者：邹军，苑建齐，吕爽，屠嘉衡，季明勇 【摘要】 　　目的探讨慢性疲劳综合症（GFS）造模对SD大鼠行为及外周血淋巴细胞凋亡的影响，并观察运动配合中药及艾灸作用效果。方法用48只Sprague - Dawley 大鼠，按体质量分4组即对照组(CG)、CFS模型组(CFSG)、运动加中药组(ETCMG)和艾灸组(MG)，每组12只。试验共进行3次旷场与悬尾行为测试，最后进行水迷宫实验和取外周血，流式细胞仪测定淋巴细胞凋亡指数。结果CFSG 、ETCMG、MG参与造模的3组体质量的增长受到严重抑制；旷场行为CFSG行为指数明显降低，ETCMG和MG旷场行为指数比CFSG显著升高；悬尾行为CFSG显著降低，ETCMG比CFSG显著升高，MG悬尾与CFSG无差异；水迷宫可视平台组间无差异，探索第2象限参与造模3组的时间比CG延长；细胞凋亡指数CFSG比CG显著升高，ETCMG比CFSG显著降低，且与CG无差异，MG与CFSG无差异。结论CFS造模抑制大鼠体重增长，行为表现抑郁，外周血淋巴凋亡细胞增多；运动加中药方法有效缓解大鼠行为症状，降低凋亡细胞指数；艾灸方法可缓解大鼠行为症状，但对细胞凋亡未见影响；两种干预方法对记忆行为未见影响。 【关键词】 疏肝健脾中药； 跑笼运动； 艾灸； 足三里； 慢性疲劳综合症； 动物行为； 淋巴细胞凋亡 　　自从1988年由Holmes等［1］将慢性或反复发作的极度疲劳为特征的症候群命名为慢性疲劳综合症(Chronic Fatigue Syndrome ,CFS)以来,世界很多国家的学者对此进行研究，拟定了相应的诊断标准。 　　该病的发生与长期精神紧张，脑力、体力长期过度劳累，并与神经、体液调节和免疫功能失调有关。特别是脑力劳动者尤为突出，对社会影响大，还没有安全、有效的药物和方法治疗,护理调养费用较高，给社会卫生福利部门造成较大的压力［2］,因此引起了世界各国的广泛重视，开展了有针对性的研究。近年来，我国也开展有关CFS的基础与临床方面的研究工作，在发病机理，影响因素，症状表现等多有涉及。有关中医药治疗CFS的疗效与机理报道较多，但将运动配合中医药防治CFS的研究较少。 　　研究有关CFS模型的建立，不同学者方法不尽相同，我们采用慢性束缚、电击、冰水游泳无规律进行刺激的复合方法建立了包含体力和精神的慢性疲劳动物模型［3］。动物身体和精神的疲劳一定程度反映在动物行为和免疫状态上，根据慢性疲劳综合症和祖国医学对“疲劳”的治疗原则,本文拟通过观察动物行为和外周血淋巴细胞凋亡的改变, 从动物行为学和免疫学角度来探讨慢性疲劳综合症发生机制，并观察运动配合疏肝健脾中药和艾灸足三里对其调理作用。 　　1 材料与仪器 　　1.1 实验对象由上海西普尔- 必凯实验动物有限公司提供SPF级健康雄性Sprague-Dawley大鼠48只，2月龄，体质量196～247 g，在中国人民解放军第二军医大学基础部神经生物试验室动物房饲养，温度20～22℃，光/暗周期为自然光暗周期，实验前适应饲养1周，自由获得饮水和饲料。 　　1.2 仪器见表1。表1 实验仪器（略） 　　1.3 试剂用品药艾条：苏州市东方艾绒厂，批准文号：国药准字中药片剂(由柴胡、白芍、佛手、茯苓、 黄芩、川芎、小麦、大枣、甘草等组成,广州中医药大学提供,批 ，每片0.5 g，含10.15 g 生药)。淋巴细胞分离液、Binding Buffer试剂、PI碘化丙啶（BEEKMAN COULTER公司）。RPMI 1640 w/o L-Glutamine w/25 mM HEPES；0.3%戊巴比妥250 ml；生理盐水。无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15 mol/L pH 7.2；NaCl 8.0 g KCl 0.2 g Na2HPO4 1.15 g KH2PO4 0.2 g；将上述试剂依次溶于1 000 ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10～15 min，存在4℃冰箱中备用。 　　2 方法 　　2.1 动物分组称体质量后，将大鼠随机分为对照组(CG)、CFS模型组(CFSG)、运动加中药组(ETCMG)和艾灸组(MG)（组间无差异）。每组12只，标记后分笼饲养，每笼6只。 　　2.2 CFS造模方法对CFSG、ETCMG、MG三组实施造模。每天电击，用波宽2 ms的电脉冲，1 mA电流强度，时间隔20 s，每天15次电击，共5 min。束缚和冷水游泳隔日交替进行：将大鼠放进自制的行为束缚筒内，束缚2 h/次；冷水游泳，水温12℃，时间5 min，游泳后用电吹风机将大鼠吹