贵州野生天麻遗传多样性AFLP指纹分析.docVIP

贵州野生天麻遗传多样性AFLP指纹分析 　作者：程纪伦, 范爱辉, 苟占平, 典灵辉, 杨丽, 王晓丽 【摘要】 目的研究野生天麻的遗传多样性，为合理利用野生天麻种质资源、为天麻的进一步系统选育研究提供一定的理论依据。方法利用AFLP技术，采用8对M+3和P+3引物组合对23份贵州野生天麻品种进行了总基因组DNA水平上的多态性检测，用NTSYSpc-2.10s 软件的UPGMA 方法对检测结果进行聚类。结果共获得552条可统计的条带，其中396条呈多态性，多态性带百分率约72%。UPGMA聚类可以将贵州不同产地的野生天麻很好地区分开来。结论该实验揭示了贵州野生天麻种质丰富的遗传多样性，聚类分析结果表明多数来源地相同的天麻种质表现出较为密切的亲缘关系。 【关键词】 野生天麻； 遗传多样性； AFLP 　　Abstract：ObjectiveTo study the genetic polymorphism of wild Gastrodia elata Bl. in Guizhou province, and provide reference for the utilizing its germplasm resources and cultivating new varieties. MethodsThe phylogentic relationships among 23 wild Gastrodia elata Bl. in Guizhou were analyzed using AFLP to study the genetic diversity with eight AFLP primer combinations (M+3 and P+3) . The determined molecular markers were analyzed through UPGMA method of software NTSYSpc- 2.10 s.Results552 bands were detected，396 of which were polymorphic, and the high ratio of polymorphic bands (86%) were observed in this study. The dendrogram from the clustering of UPGMA showed good classification of all population. Conclusion Our results suggest that wild Gastrodia elata Bl. in Guizhou shows abundant genetic diversities. Results of cluster analysis showed that the classification based on AFLP markers of wild Gastrodia elata Bl. in Guizhou is consistent with their origin. 　　Key words：Wild Gastrodia elata Bl.； Genetic polymorphism； AFLP 　　天麻为兰科(Orehidaeae)多年生草本植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥根茎，为我国传统名贵中药。 其主要有效成分天麻素具有广泛的药理作用, 具有镇静催眠、抗惊厥、增智、健脑、治疗老年性痴呆症、抗氧化、延缓衰老、增强免疫功能、调节心血管等作用。就天麻遗传学研究来看，传统的研究主要是从形态学方面进行研究。近年来研究主要是运用RAPD［1,2］，AFLP［2］ ，ISSR［3］等分子生物学技术对其遗传进化、品种分类鉴定等方面进行研究。野生天麻作为一种重要的遗传种质资源，未见有对其遗传多样性进行研究的报道。本研究利用AFLP技术, 以8对引物对23株不同来源的贵州野生天麻基因组DNA进行分析,旨在从分子水平上认识贵州天麻野生资源的遗传多样性和其遗传亲缘关系, 为天麻种质资源的收集保存和有效利用提供理论依据。 　　1 仪器与材料 　　1.1 材料样品采自贵州不同地区或相同地区的不同居群，均为野生未受人为干扰状态下生长，具体类型和分布见表1；所有样品经贵阳医学院药学院生药学教研室王晓丽教授鉴定。表1 样品编号分类及产地（略） 　　1.2 仪器与试剂试验中用MseⅠ、PstⅠ、EcoRⅠ、T4 DNA lingase、RNA酶试剂来自NEB公司，丙烯酰胺（SIGMA）、聚丙烯酰胺（SIGMA），接头和引物由上海生工生物公司合成，Taq酶、dNTP来自大连宝生物公司。DYC2-2