高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株分泌NO、ET影响及.docVIP

高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株分泌NO、ET影响及 　 作者：胡小勤 陈利国，曾学文，张敏，戴勇 【摘要】 目的观察高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）分泌NO，ET的影响及丹参酮ⅡA（TanⅡA）的干预作用。方法硝酸还原酶法检测细胞分泌的一氧化氮（NO）浓度，非平衡法测定细胞分泌的内皮素（ET）；观察不同浓度丹参酮ⅡA对细胞分泌NO，ET的干预作用。结果血淤组分泌的NO低于对照组、健康组，且差异显著（Plt;0.05或Plt;0.01）；血淤组分泌的ET高于对照组、健康组、非血淤组，且差异显著（Plt;0.05或Plt;0.01）；TanⅡA 40，20 μg/ml剂量组分泌的NO较血淤组低，10，5 μg/ml剂量组分泌的NO较血淤组高，但均无显著差异；TanⅡA40，20，15，5 μg/ml剂量组分泌的ET较血淤组低，其中40，20 μg/ml剂量组无显著差异，10，5 μg/ml剂量组有显著差异（Plt;0.01）。结论血淤证患者血清可损伤培养的内皮细胞，引起其内分泌功能发生改变，TanⅡA具有保护内皮细胞的功能。 【关键词】 高血压病； ECV-304； 血淤证 血淤证见于多种疾病，是一种综合性病理状态，形成机理非常复杂。其形成与血液流变学异常、血流动力学异常、微循环障碍、血液凝固性、炎症病理过程、动脉粥样硬化、红细胞膜流动性及血管内皮细胞损伤等有关，其中热点是对血管内皮细胞损伤的研究。血管内皮细胞损伤与血淤证发生、发展密切相关，因此通过观察血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）活性的影响，可深入研究血淤证形成的病理机制。本实验研究了高血压病血淤证患者血清对ECV-304分泌NO，ET的影响及丹参酮ⅡA（TanⅡA）的干预作用。 　　1 材料与仪器 　　1.1 细胞来源人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）由武汉大学“中国典型培养物保藏中心”提供。 　　1.2 血清的收集 　　1.2.1 研究对象的选择高血压病血淤证组：40例，为2005-05～2006-05暨南大学附属第一医院心血管科、中医科门诊及住院确诊患者。诊断符合世界卫生组织/国际高血压病学会统一的“高血压病”诊断标准，血淤证诊断参照1986年修订的诊断标准。其中，按血压级别分为：2级高血压患者32例，3级高血压患者8例；男性患者22例，女性患者18例；平均收缩压（161.63±17.74）mmHg，平均舒张压（91.13±15.21）mmHg；平均年龄（75.70±7.06）岁。本课题选用的血淤证病例主要为气虚血淤证、阴虚血淤证、痰湿血淤证，少量为热结血淤证和气滞血淤证。所选病例能较好的代表血淤证的各种兼证的临床分布情况。 　　高血压病非血淤证组：40例，为同期暨南大学附属第一医院心血管科、中医科门诊及住院确诊患者。诊断符合世界卫生组织/国际高血压学会统一的“高血压病”诊断标准，其中，按血压级别分为：2级高血压患者31例，3级高血压患者9例；男性患者20例，女性患者20例；平均收缩压（156.43±16.01）mmHg，平均舒张压（87.53±9.69）mmHg；平均年龄（76.53±8.95）岁。 　　两组患者均为原发性高血压病患者，排除有靶器官损害或糖尿病，排除心、脑、肾等并发症，检查前1周未服用影响血压的药物。两组患者的血压分级、性别分布、平均血压、平均年龄无统计学差异（Pgt;0.05），具有可比性。 　　健康组：选择暨南大学医学院中医系一年级本科生健康志愿者30人作为正常对照组。健康人血压均在正常范围，与高血压病患者（包括血淤证和非血淤证患者）血压比较，有统计学差异(Plt;0.01)。 　　1.2.2 血清收集患者组及对照组均空腹取血，置入无菌带帽不抗凝干燥试管，自凝后离心（4℃，2 000 r/min，15 min），取上清液置无菌EP管，冻存于-20℃，备用。 　　1.3 药物及试剂配制TanⅡA系中国药品生物制品检定所生产，批号：110766-200417，取TanⅡA 2 mg，溶于50 μl的DMSO，制成母液，浓度为40 μg/μl，4℃避光保存。 　　一氧化氮试剂盒购自南京建成生物工程研究所，内皮素放免药盒购自解放军总医院科技开发中心放免所，DMEM培养基为Gibco公司产品；胎牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所产品；胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）为Sigma公司产品；青霉素、链霉素为华北制药股份有限公司产品；其他试剂如碳酸氢钠、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、葡萄糖，均为国产分析纯。 　　1.4 仪器721分光光度仪为上海第三分析仪器厂产品；FJ-2008G型γ计数器为西安二六二厂产品；超速离心机为日本HITACHI公司产品