Mg2+对胎鼠皮层神经元NMDA兴奋毒性损伤模型保护作用.doc

Mg2+对胎鼠皮层神经元NMDA兴奋毒性损伤模型保护作用 　【摘要】 目的 研究Mg2+对神经细胞兴奋性氨基酸NMDA损伤的保护作用。 方法 采用原代培养的大鼠皮层神经细胞模型，给予NMDA直接损伤，加入不同浓度的Mg2+，测定神经细胞损伤MTT变化。结果 Mg2+对兴奋性氨基酸损伤保护作用在1.0~3.0 mmol/L 范围内存在，2.0 mmol/L 效果最好。结论 在临床治疗中尽早使用镁剂，剂量根据脑脊液浓度尽快调整到2.0 mmol/L 保护作用最好。 【关键词】 NMDA受体；镁离子；脑损伤 　　Protective Effects of Mg2+ on Primary Cortical of Rat Damaged Model by NMDA 　　Lin Yerong, Yu Yigang 　　(1. Department of Obstetrics and Gynecology, PLA 175th Hospital, Zhangzhou 363000, China; 2. Department of Neurosurgery, Zhujiang Hospital, Guangzhou 510282, China) 　　Abstract： Objective To investigate the neuroprotective effects of Mg2+ on the damage by NMDA. Methods Using primary cultured rat cortical neurons, we observed the neuron changes in MTT damaged by NMDA and protective effects of Mg2+. Results The neuroprotective effect of Mg2+ appeared when its strength was between 1.0-3.0 mmol/L and the effect was most effective when the strength was 2.0mmol/L.Conclusion We should use Mg2+ early in clinic, and adjust its strength to 2.0mmol/L in brain cerebral fluid. 　Key words： NMDA receptor;Mg2+;brain injury 新生儿窒息是引起新生儿缺氧缺血性脑病的主要原因，具有较高的病死率和神经系统后遗症发生率，对社会人口素质具有严重的影响。其发生主要与围产期窒息有关，一般宫内窒息引起者占50%。因此，如能对胎儿宫内窘迫尽早进行有效的干预，可显著降低其脑损伤发生率及致残率。胎儿的脑代谢最旺盛，其氧耗量占全身氧耗量的一半，所以一旦出现宫内窘迫，脑损伤首当其冲。为解决这一问题我们利用培养的胎鼠皮层神经细胞缺氧缺血所致兴奋性氨基酸NMDA(N甲基D天冬氨酸)损伤模型，探讨硫酸镁对于宫内窘迫所致胎儿大脑缺氧缺血产生的兴奋性氨基酸毒性的保护作用，现将结果报告如下。 　　1 材料和方法 　　11 动物、试剂与设备 　　（1）实验动物 ： 孕龄2周Wistar大鼠，普通级，由南方医科大学动物中心提供。（2）试剂：胎牛血清，马血清，DMEM粉剂购自 GibcoBrl 公司，阿糖胞苷购自Pharmacia Bio 公司，胰蛋白酶，多聚赖氨酸，谷氨酰胺，N3，NMDA，MK801购自 sigma公司。其他试剂均为国产分析纯。（3）设备：二氧化碳细胞培养箱（日本三洋公司），荧光相差显微镜（日本Olympus），DG3022Ａ酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂) 　　12 方法 　　121 皮层神经细胞培养[1] 　　10%水合氯醛2 ml 麻醉大鼠，无菌操作取胚胎，切取浸泡75%乙醇1 min 胎鼠头，解剖出完整鼠脑，预冷解剖液中分离去除软膜、血管，取大脑皮质，漂洗，用眼科剪将其碎成块，0.25%胰蛋白酶37 ℃ 培养箱中消化30 min。接种液洗3次，最后再用接种液1 ml 混悬。将上述混悬液中组织块反复吹打，见浑浊后将上清液移入培养瓶待用。收集含单细胞悬液的上清液4~5 ml 于培养瓶中。细胞记数，接种密度1×106个细胞于96孔培养板中。培养24 h 到细胞贴壁后，换全液用培养液培养4~5 d，观察神经元生长良好，换用阿糖胞苷培养液（4 mg/L）半液培养48~72 h 抑制神经胶质细胞及杂细胞生长，得到单纯培养的原代神经细胞。隔3~4 d 换全液1次。至8~10 d 后行NMDA损伤保护测定。 　　122 NMDA毒性损伤和Mg