Toll样受体4对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达影响.doc

Toll样受体4对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达影响 　【摘要】 目的 探讨Toll样受体4（TLR4）对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达的影响。方法 小鼠随机分为3组，分别为假手术组和缺血再灌注组、TLR4阻断组，各组又分1、2、3、4 d 4个时间点组。采用TLR4抗体封闭阻断TLR4，Western印迹检测皮质TLR4蛋白、干扰素β(IFNβ)蛋白表达量，免疫组化方法检测TRIF表达变化。结果 缺血再灌注组TLR4蛋白、IFNβ和TRIF表达水平明显高于假手术组表达水平（Plt;0.05），而TLR4阻断组TLR4蛋白、IFNβ和TRIF表达水平明显少于缺血再灌注组（Plt;0.05）。结论 缺血再灌注可激活TLR4，并引起TRIF和IFNβ表达量增加，而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后，TRIF和IFNβ表达量减少，提示TLR4通过上调TRIF表达参与脑缺血再灌注的反应机制。 【关键词】 脑缺血再灌注；TLR4；TLR4阻断；TRIF；IFNβ 【Abstract】 Objective To study the effect of Tolllike receptor 4（TLR4）on the expression of TRIF during the inflammatory reaction induced by cerebral ischemia reperfusion in mice. Methods After blockade of TLR4 by TLR4 antibody，the expression of TLR4 and interferon (IFN)β at the protein level in cortex was examined by Western blot respectively. The expression of TRIF was measured by immunohistochemistry stain. Mice were randomly divided into sham group, ischemia reperfusion group and TLR4 blocking group in different time points （1, 2, 3 d and 4 d）. Results In the right cortex, TLR4 protein, IFNβ and TRIF expression of ischemia reperfusion group was distinctly higher than that of sham and TLR4 blocking group（Plt;0.05）. Conclusions TLR4 participates in cerebral ischemia reperfusion by upregulating the expression of TRIF. 【Key words】 Cerebral ischemia reperfusion; TLR4; TLR4blocked; TRIF; IFNβ 　　Toll样受体4(TLR4）信号通路包括髓样分化因子88(MyD88) 依赖性 (MyD88途径) 和MyD88 非依赖性（TRIF依赖性）两个途径〔1，2〕。TRIF为TLR4MyD88 非依赖性信号转导途径中的主要接头蛋白。目前，对TLR4介导的TRIF依赖信号通路的研究主要集中在抗感染免疫反应中〔3，4〕，在脑缺血再灌注过程中该信号途径是否发挥作用还没有相关报道。本研究通过观察脑缺血再灌注损伤是否激活TLR4及采用TLR4抗体阻断TLR4后，其胞内衔接蛋白TRIF的表达，探讨TLR4参与脑缺血再灌注的反应机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要试剂 　　兔抗TLR4单克隆抗体（sc16240）、辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG二抗、βactin抗体、山羊抗IFNβ单克隆抗体IgG（sc17569）（美国Santa Cruz 公司）；兔抗TRIF单克隆抗体IgG（1866115184）（美国Geneway公司）；免疫组化染色试剂盒（SP9001）（北京中山公司）。 　　1.2 实验动物的分组 　　健康昆明种小鼠144只，雌雄兼用，体重18～22 g，由中国医科大学实验动物中心提供随机分为3组：(1)假手术组（n=48）；(2)缺血再灌注组（n=48）；(3)TLR4阻断组（n=48）。各组又分1、2、3及4 d 4个时间点组（n=12）。 　　1.3 小鼠脑缺血再灌注模型的制备 　　手术在室温25℃、湿度50%的条件下进行。用2%戊巴比妥钠腹腔注射（