两种类型抑郁症大鼠海马及血清内脑源性神经营养因子水平比较.doc

两种类型抑郁症大鼠海马及血清内脑源性神经营养因子水平比较 　 作者：胡荫 尹维刚 林荣 王力 【摘要】 目的 比较应用两种方法制备的抑郁症大鼠模型血清及海马内脑源性神经营养因子(BDNF)水平的改变，为抑郁症的诊断及治疗机制的研究奠定基础。方法 应用慢性温和性刺激制备外源性抑郁症大鼠模型，通过在出生第8天的幼鼠腹腔注射五羟色胺再摄取抑制剂氯米帕明制备成年内源性抑郁症大鼠模型。应用ELISA和免疫组织化学方法检测血清及海马内BDNF水平。结果 两种模型抑郁症大鼠的蔗糖摄取量与正常对照组相比均明显减少(Plt;0.01);与正常对照组相比，两种抑郁症大鼠血清BDNF水平明显降低(Plt;0.01)，而两种抑郁症大鼠血清BDNF水平则无显著差异(Pgt;0.05);内源性及外源性抑郁症大鼠海马内BDNF阳性细胞数与正常组大鼠相比均降低(Plt;0.05)，但内源性抑郁症大鼠海马内BDNF阳性细胞数降低尤为明显(Plt;0.01)。结论 内外源性抑郁症大鼠脑内BDNF水平均较正常组大鼠明显降低，但内源性抑郁症大鼠BDNF减少尤其明显。海马内BDNF水平的降低可能是造成抑郁症患者认知和记忆功能障碍的原因之一。 【关键词】 抑郁症;脑源性神经营养因子;海马;大鼠 以往众多的学者通过研究发现脑源性神经营养因子(BDNF)对神经元的生长，分化，存活，可塑性及损伤后的修复具有重要作用。BDNF在中枢神经系统、周围神经系统、内分泌系统、原始卵泡、骨骼和软组织、血液中等区域内广泛的表达。近几年国外学者报道，情绪障碍患者具有低水平的血清BDNF。有研究显示〔1〕，未服抗抑郁药的抑郁症患者血清BDNF水平较正常对照者低，且血清BDNF水平与抑郁程度呈正相关，女性患者较男性患者低。还有研究发现得出了基本相似的结果〔2〕，且未服药的抑郁症患者的低水平血清BDNF经服药治疗后恢复到基础水平:虽然抗抑郁治疗也许影响了血清BDNF的水平，但不是一种剂量依赖关系。为此本实验主要观察了两种抑郁症大鼠模型血清及海马内BDNF水平的变化，为进一步探讨抑郁症发病机制奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 SD大鼠，体重175～270 g，由宁波大学实验动物中心提供，饲养于标准环境内,室温(22±2)℃，12 h黑12 h白，早8点开灯，自由饮食、饮水。 　　1.2 抑郁症大鼠模型制备 　　1.2.1 慢性应激(CMS)抑郁症大鼠模型制备 慢性刺激过程参考Roth报道〔3〕稍加改进，整个刺激过程尽量减少大鼠疼痛和不舒适而让刺激达到最大的不可预知性。即每天随机给予大鼠电击足底、禁食、冰水游泳、禁水、热刺激、颠倒黑白、无刺激和夹尾刺激中的一种。 　　1.2.2 内源性抑郁症大鼠模型 参考国外文献报道〔4，5〕，给予新出生第8天的雄性幼鼠腹腔内注射新鲜配制的氯米帕明40 mg/kg，注射至出生后21 d结束，然后正常饲养到两个半月后，内源性抑郁症大鼠制备完成，进行下一步实验。对照组给予腹腔注射同量生理盐水。 　　1.3 糖水消耗试验 根据文献〔6〕大鼠首先训练饮用1%蔗糖水，即在开始的24 h内用1%蔗糖水代替自来水，然后在测量日时给予1%蔗糖水100 ml饮用24 h，同时禁食，通过称饮水瓶重量测量大鼠蔗糖水的饮用量，此后每间隔1 w均进行一次禁食糖水测试，此过程贯穿于整个实验。 　　1.4 BDNF的测定 采用双抗体夹心ABCELISA法。用抗大鼠BDNF单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的大鼠BDNF与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠BDNF，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物标记抗生蛋白链菌素(Streptavidin)与生物素结合，加入酶底物OPD，出现黄色，加终止液硫酸，颜色变深，在492 nm处测定OD值，大鼠BDNF浓度与OD值呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中大鼠BDNF的含量。单位为ng/ml。BDNF试剂盒购自于南京斯倍恩科技有限公司。 　　1.5 BDNF免疫组织化学染色 将切片入0.1 mol/L PBS漂洗后，0.5%H2O2处理，漂洗3次，5%正常羊血清封闭，分别加入兔抗大鼠BDNF多克隆抗体(1∶100)、TrkB(1∶1 000)， 4℃孵育48 h，漂洗3次，入生物素化羊抗兔IgG(1∶200)室温孵育1 h，漂洗3次，入ABC复合物(1∶100)室温孵育1 h，漂洗3次，DAB液显色，漂洗3次，贴片，室温下过夜。梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片。阴性对照切片以0.1 mol/L PBS分别代替兔抗大鼠BDNF、TrkB抗体，其他步骤完全相同。 　　1.6 数据收集 利用Motic B5显微镜、电脑和图像分析软件进行图像采集和处理。对照大鼠脑立体定位图谱〔7〕，各组每只大鼠选取大致相同部位的3张切片，每张切片分别在海马的CA1